發(fā)布時間：2021-08-12 18:09

　　TCP基因家族是植物特異性轉(zhuǎn)錄因子,并且在植物生長和發(fā)育過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。為了探討月季花器官發(fā)育中RcTCP9基因?qū)ζ涞挠绊?本研究通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)構(gòu)建植物表達(dá)載體,其檢測結(jié)果表明,成功構(gòu)建了含月季RcTCP9基因的植物表達(dá)載體。以月季作為為試驗材料,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉片浸入法瞬時轉(zhuǎn)化月季,獲得了表達(dá)eGFP的月季葉片。以月季組培苗為受體材料。得到了以下結(jié)果:1.本研究通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),根據(jù)月季RcTCP9基因的保守序列,設(shè)計了一對互補引物,用T4連接酶連接到質(zhì)粒載體pKSE402中,經(jīng)測序后,表明含月季RcTCP9基因的植物表達(dá)載體構(gòu)建成功。2.以月季作為試驗材料,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉片浸入法瞬時轉(zhuǎn)化月季葉片,獲得了表達(dá)綠色熒光的月季葉片。由此表明構(gòu)建的含月季TCP9基因的植物表達(dá)載體能夠在月季中表達(dá)。3.為了保證經(jīng)過農(nóng)桿菌浸染過后月季腋芽的正常生長,防止農(nóng)桿菌增殖過快以及篩選抗性芽,選用Kan和Cef對月季腋芽進(jìn)行共同作用試驗,將月季腋芽分別置于還有不同濃度Kan和Cef的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,觀察其腋芽的萌發(fā)及生長情況。最終選擇含150 ... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大腸桿菌PCR結(jié)果

第二章含pKSE402-TCP9重組質(zhì)粒載體的構(gòu)建152.5.2pKSE402-RcTCP9重組質(zhì)粒的鑒定將PCR檢測正確的大腸桿菌活化，使用質(zhì)粒提取小試劑盒提取質(zhì)粒，以質(zhì)粒為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，用GelDocXR+凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照記錄，得到的條帶大小為99bp（圖2-2）。并將PCR檢測正確的質(zhì)粒送往生工生物工程(上海)股份有限公司測序。圖2-3為載體的物理圖譜。圖2-2：大腸桿菌質(zhì)粒PCR結(jié)果M：分子量標(biāo)準(zhǔn)markerDL2000；CK：ddH2O；1-4：含RcTCP9基因的重組質(zhì)粒載體Fig.2-2TheresultsofplasmidPCRinE.coliM：DNAmarkerDL2000；CK：ddH2O；1-4：RecombinantplasmidvectorcontainingRcTCP9gene圖2-3：pKSE402-RcTCP9載體物理圖譜Fig.2-3PhysicalAtlasofpKSE402-RcTCP9carrier

第二章含pKSE402-TCP9重組質(zhì)粒載體的構(gòu)建152.5.2pKSE402-RcTCP9重組質(zhì)粒的鑒定將PCR檢測正確的大腸桿菌活化，使用質(zhì)粒提取小試劑盒提取質(zhì)粒，以質(zhì)粒為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，用GelDocXR+凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照記錄，得到的條帶大小為99bp（圖2-2）。并將PCR檢測正確的質(zhì)粒送往生工生物工程(上海)股份有限公司測序。圖2-3為載體的物理圖譜。圖2-2：大腸桿菌質(zhì)粒PCR結(jié)果M：分子量標(biāo)準(zhǔn)markerDL2000；CK：ddH2O；1-4：含RcTCP9基因的重組質(zhì)粒載體Fig.2-2TheresultsofplasmidPCRinE.coliM：DNAmarkerDL2000；CK：ddH2O；1-4：RecombinantplasmidvectorcontainingRcTCP9gene圖2-3：pKSE402-RcTCP9載體物理圖譜Fig.2-3PhysicalAtlasofpKSE402-RcTCP9carrier

【參考文獻(xiàn)】：
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