以云南省林業(yè)和草原科學(xué)院森保所室內(nèi)飼養(yǎng)的桔小實蠅為材料,采用RT-PCR技術(shù),克隆桔小實蠅（Bactrocera dorsalis Hendel.）flightin的基因片段,并以此為靶標(biāo),設(shè)計有效的干擾片段,以線蟲RNAi干擾載體L4440為載體,構(gòu)建桔小實蠅flightin基因RNAi載體。通過PCR、酶切檢測及測序,證明表達(dá)載體構(gòu)建正確。本研究為通過RNAi研究桔小實蠅flightin的基因功能奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：西部林業(yè)科學(xué). 2020,49(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

桔小實蠅總RNA提取結(jié)果

把載體質(zhì)粒L4440和膠回收得到的目的片段分別經(jīng)限制性內(nèi)切酶SacI和XhoI在37℃下,雙酶切1h后,電泳檢測結(jié)果見圖2的2、5、6泳道。L4440質(zhì)粒大小為2 790 bp,經(jīng)SacI和XhoI雙酶切后,得到的線性化載體片段約為2 755 bp(圖2的2泳道),大小正確。桔小實蠅flightin基因及對照egfp基因經(jīng)雙酶切后位置同3、4泳道的PCR產(chǎn)物。2.3 桔小實蠅flightin基因及對照egfp基因干擾 表達(dá)載體檢測

重組質(zhì)粒L4440-flightin和L4440-egfp經(jīng)雙酶切后,1%瓊脂糖凝膠電泳20min檢測均分別得到兩條帶,2 755bp的線性化L4440質(zhì)粒載體,及678bp和187bp左右的目的片段(圖3),表明桔小實蠅flightin基因和egfp基因片段成功轉(zhuǎn)入L4440質(zhì)粒中,與預(yù)期設(shè)計一致。將鑒定為陽性克隆的菌液送測序,雙向測序結(jié)果與目的基因序列完全一致,閱讀框正確,說明已經(jīng)成功構(gòu)建了L4440-flightin和L4440-egfp干擾表達(dá)載體。3 結(jié)論與討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]褐飛虱flightin的原核表達(dá)及其差異表達(dá)檢測[J]. 張小琴,胡玉瓊,張傳溪.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2013(04)
[2]桔小實蠅肌球蛋白輕鏈2基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 申建梅,胡黎明,賓淑英,林進(jìn)添.  昆蟲學(xué)報. 2011(05)
[3]中國桔小實蠅種群的微衛(wèi)星多態(tài)性分析[J]. 李偉豐,楊朗,唐侃,曾玲,梁廣文.  昆蟲學(xué)報. 2007(12)
[4]基于熒光標(biāo)記的怒江流域桔小實蠅（Bactrocera dorsalis）的遷移擴(kuò)散[J]. 陳鵬,葉輝,母其愛.  生態(tài)學(xué)報. 2007(06)
[5]昆蟲飛行肌蛋白質(zhì)[J]. 楊璞,余海忠,程家安,祝增榮.  昆蟲知識. 2005(06)



本文編號：3321208