’云香’水仙（Narcissus tazettavar.’Yunxiang’）[1-2]是福建農(nóng)林大學(xué)園藝遺傳育種研究所選育的多花水仙新品種,2012年4月1日通過福建省農(nóng)作物品種審定委員會認(rèn)定,與其他水仙品種相比,’云香’水仙花朵大、花朵數(shù)量多、花期長、香氣濃,花葶挺立,可用作切花。但是切花對貯藏保鮮和花期要求很高。本研究從’云香’水仙花瓣中分離乙烯生物合成途徑關(guān)鍵酶基因ACS和ACO基因,對其進(jìn)行表達(dá)分析和載體構(gòu)建,并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草,獲得轉(zhuǎn)基因植株,為進(jìn)一步鑒定所分離基因功能和后續(xù)轉(zhuǎn)化水仙提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。最終通過基因工程調(diào)節(jié)乙烯代謝途徑來獲得更長貯藏保鮮期的’云香’水仙,以拓展多花水仙的用途,使其更適于用作鮮切花。本研究主要結(jié)果如下:1.探究了多花水仙ACS基因的序列特征及功能,以’云香’水仙盛花期花瓣為試驗(yàn)材料,根據(jù)’云香’水仙花朵轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)信息,通過RT-PCR方法克隆出1個ACS基因,命名為NtACS1（Genbank登錄號為KX082936）,其開放閱讀框（ORF）長度為552bp,編碼183個氨基酸。編碼蛋白質(zhì)分子量約為20.6 kD,理論等電點(diǎn)為6.30,不穩(wěn)定... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１提取的總ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??

使用東盛生物通用ＲＮＡ提取試劑盒Ｒ１０５１提取‘云香’水仙盛花期花瓣總??ＲＮＡ，通過核酸蛋白測定儀進(jìn)行檢測（表２－７）。取５ｕｌ進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢??測，電泳結(jié)果如圖２－１所示，ＲＮＡ條帶完整，分別為２８Ｓ、１８Ｓ和５ＳＲＮＡ，且??２８Ｓ條帶亮度是１８Ｓ條帶的兩倍，說明提取的水仙盛開期花瓣總ＲＮＡ質(zhì)量良好，??可用于后續(xù)試驗(yàn)。以‘云香’水仙盛花期花瓣ｃＤＮＡ為模板，用特異性引物進(jìn)行??ＰＣＲ擴(kuò)增，產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，得到一條特異的條帶，與預(yù)期基因片段大小一??致（圖２－２）。測序結(jié)果顯示，基因的全長為５７８?ｂｐ，開放閱讀框（ＯＲＦ）為５５２??ｂｐ，編碼１８３個氨基酸。將這個基因命名為ｉＶ＾ＣＳ７。??表２－７?ＲＮＡ質(zhì)量檢測結(jié)果??Ｔａｂｌｅ?２－７?Ｑｕａｌｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＲＮＡ??項(xiàng)目?＾??（Ｐｒｏｊｅｃｔ）?（Ｒｅｓｕｌｔ）??Ａ２６０／Ａ２８０?２．１６??Ａ２６０／Ａ２３０?１．７２??濃度（ｎｇ／｜ｉＬ）?６０８．５８???ｊ．??圖２－１提取的總ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌ

ｈｔ?ｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｅ?ｔｔ．?ｅｓｈｈｈｈ??圖２－３?ＮｔＡＣＳｌ蛋丨＇丨二級結(jié)構(gòu)預(yù)測??Ｃ：隨機(jī)卷曲ｔ：?ｐ轉(zhuǎn)炻ｅ：延伸鏈ｈ：?ｃｔ螺旋??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＮｔＡＣＳｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ．??Ｃ：?Ｒａｎｄｏｍ?ｃｏｉｌ?ｔ：?Ｂｅｔａ?ｔｕｒｎ?ｃ：?Ｅｘｔｅｎｄｅｄ?ｓｔｒａｎｄ?ｈ：?Ａｌｐｈａ?ｈｅｌｉｘ??ｉｍ??圖２－４?Ｐｈｙｒｃ２預(yù)測的‘云香’水仙ＡＷ?ＣＳ７蛋白三級結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．２－４?Ｔｈｅ?ｔｅｒｔｉａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＮｔＡＣＳｌ?ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｐｈｙｒｅ２??３．３?ＮｔＡＣＳｌ蛋白的基本特性分析??利用ＳｉｇｎａｌＰ４．１Ｓｅ；ｆＶｅｒ?qū)Π毙鬯嵝蛄行盘栯倪M(jìn)行預(yù)測（附圖Ｃｌ）。結(jié)果表明，??ＮｔＡＣＳｌ原始剪切位點(diǎn)（Ｃ?ｓｃｏｒｅ）最高在第２６個氨基酸位置，分值為０．１６９，綜??合剪切點(diǎn)分值（Ｙ?ｓｃｏｒｅ）在第２６個氨基酸處最大，分值為０．１８０，信號肽分值??（Ｓ?ｓｃｏｒｅ）最大在第］３個氨基酸位置，為０．２８７，ＭＪＣＳ７第〗？２５個氨基酸的??平均Ｓｓｃｏｒｅ為０．１９５，因此推斷ＭＡＣＳＩ沒有信號肽，不是分泌型蛋｜與。利Ｊｌｊ??Ｐｒｏｔｐａｒａｍ等在線：丨：具預(yù)測ＮｔＡＣＳｌｌＫ丨４的越本理化性質(zhì)（表２－８），結(jié)來－表明，??ＮｔＡＣＳｌ蛋白相對分子質(zhì)遒約為２０．６?ｋＤ，等電點(diǎn)為６．３０，分子式為??Ｃ９ｍＨ１４４７Ｎ２４９〇２６６Ｓ１５


本文編號：3319024