WRKY轉(zhuǎn)錄因子是高等植物中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,它可以與靶基因的順式作用元件互作后對目標(biāo)基因進(jìn)行調(diào)控。WRKY轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控植物的生長發(fā)育、生物學(xué)代謝以及抗逆過程,研究發(fā)現(xiàn)過表達(dá)WRKY基因可以提高植物對于干旱、鹽堿、高溫的耐受性以及對病菌的耐受性,但目前對于馬鈴薯WRKY轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究較少,因此本研究通過構(gòu)建馬鈴薯WRKY基因的過表達(dá)與干擾表達(dá)載體以及酵母雙雜技術(shù)篩選與WRKY基因互作的蛋白,來研究WRKY基因的生物學(xué)特性和響應(yīng)馬鈴薯抗干旱脅迫的機制,為進(jìn)一步研究WRKY基因在馬鈴薯抗干旱脅迫方面的代謝途徑提供理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.馬鈴薯StWRKY57基因的生物信息學(xué)分析:StWRKY57基因位于8號染色體上,CDS區(qū)長762 bp,含有4個外顯子,該基因共編碼253個氨基酸,其編碼的蛋白相對分子量為28.72 kDa,理論等電點為8.84,不穩(wěn)定系數(shù)為57.47,脂肪系數(shù)為75.53,總平均親水性為-0.653,說明該蛋白為疏水性蛋白且該蛋白具有跨膜結(jié)構(gòu)。利用同源重組法成功構(gòu)建瞬時表達(dá)載體pEGFP-WRKY,并使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)染煙草,通過激光... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

酵母雙雜交原理

圖 1.2 酵母雙雜交系統(tǒng)中報告基因的構(gòu)建系統(tǒng)ig.1.2 Reporter gene construction system in yeast two-hybrid syste用的是 Y2HGold 和 Y187 這兩種經(jīng)過改造的酵母菌株株不含可以編碼轉(zhuǎn)錄因子的基因，保留了特定的報告基C 和 MEL1）及其上游活化序列，因此它們不具有可以1.2）[164,165]。將轉(zhuǎn)入不同外源轉(zhuǎn)錄因子的酵母菌株雜交以激活報告基因的轉(zhuǎn)錄[166,167]。BD 結(jié)合目的基因（誘誘餌蛋白，AD 結(jié)合靶基因成為獵物蛋白，將 BD-誘餌交后的酵母細(xì)胞中表達(dá)，若這兩個蛋白能夠互作，則可錄因子從而激活下游報告基因的表達(dá)，若兩個蛋白不互復(fù)合體與上游的活化序列結(jié)合，從而不能激活下游報告

圖 2.1 StWRKY57 的基因結(jié)構(gòu)Fig.2.1 The structures of StWRKY57 gene注: 內(nèi)含子和外顯子分別用細(xì)線條和粗線條表示Note: Introns and exons were represented by lines and filled boxes, respectivelyWRKY57 蛋白質(zhì)特性在線軟件 ProtParam 對馬鈴薯 StWRKY57 所編碼的蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行果表明該基因可以編碼 253 個氨基酸，蛋白的相對分子量為 28.72 kDa，點為 8.84，負(fù)電荷殘基總數(shù)（Asp+Glu）為 28 個，正電荷殘基總數(shù)s）為 33 個，分子式為 C1259H2015N353O396S9，原子總數(shù)為 4032，不穩(wěn)定.47，脂肪系數(shù)為 75.53，總平均親水性為-0.653，說明該蛋白為疏水性圖 2.2）。利用 TMAP 分析顯示該蛋白具有跨膜結(jié)構(gòu)（圖 2.3）。表 2.1 馬鈴薯 StWRKY57 蛋白氨基酸種類和數(shù)量Table 2.1 StWRKY57 of potato protein amino acid types and quantities殘基數(shù)量百分比（%）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]馬鈴薯抗逆相關(guān)基因SnRK2家族的克隆與功能分析[D]. 毛娟.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]津田蕪菁花青素調(diào)控基因的克隆及轉(zhuǎn)化菊花的研究[D]. 劉振華.東北林業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：3318971