根據(jù)草菇（Volvariella volvacea）的錳超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因序列,構(gòu)建重組質(zhì)粒pBAR GPE1/Mn-SOD,轉(zhuǎn)化大腸桿菌（Escherichia coli）Stbl3菌株,采用單因素實驗對誘導(dǎo)劑IPTG濃度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)、誘導(dǎo)培養(yǎng)時間（0、2、4、6、8、10 h）及MnCl₂濃度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)進(jìn)行優(yōu)化,以獲得最優(yōu)表達(dá)條件。在最優(yōu)條件下分別進(jìn)行耐熱性、耐冷性及耐鹽性分析,測定重組菌pBAR GPE1/Mn-SOD和對照菌pBAR GPE1的SOD酶活力及生長情況。結(jié)果表明:最優(yōu)表達(dá)條件為IPTG濃度1 mmol·L^-1,誘導(dǎo)培養(yǎng)時間6 h,不需要添加MnCl₂;在最優(yōu)條件下,與對照菌相比,發(fā)現(xiàn)重組菌的SOD酶活力顯著提高,生長情況較好,提高了轉(zhuǎn)化菌株的耐熱性、耐冷性和耐鹽性。 

【文章來源】：食用菌學(xué)報. 2020,27(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

PCR 擴增重組菌Mn-SOD基因的

從圖2可以看到,在相對分子質(zhì)量15000～25000之間出現(xiàn)一條明顯的蛋白質(zhì)條帶,與草菇Mn-SOD蛋白質(zhì)的理論相對分子質(zhì)量19530吻合。2.3 重組菌表達(dá)Mn-SOD蛋白質(zhì)的最優(yōu)表達(dá)條件

在加入誘導(dǎo)劑后重組蛋白質(zhì)Mn-SOD開始積累,隨著培養(yǎng)時間增加,Mn-SOD表達(dá)量逐漸增加,在6 h時(泳道4)達(dá)到最高;之后隨著培養(yǎng)時間的繼續(xù)增加,Mn-SOD的表達(dá)量開始下降;當(dāng)誘導(dǎo)時間為0～6 h時,平均灰度值逐漸增加,分別是41.969、42.909、45.172、68.347,因此最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)時間為6 h(圖4)。2.3.3 MnCl2濃度

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3302088