高等植物成花轉(zhuǎn)變過程是物種繁殖延續(xù)的基礎(chǔ),受植物體內(nèi)外信號共同調(diào)控。其中FT和TFL1是植物開花調(diào)控路徑的重要基因,處于成花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的核心位置。本研究利用超表達(dá)和CRISPR基因敲除技術(shù)研究FT和TFL1基因在柑橘發(fā)育中的作用、使用嫁接手段驗證成花相關(guān)基因的信號傳遞,以期改變柑橘長童期（juvenile period）現(xiàn)狀、培育早花或晚花柑橘新種質(zhì)。本研究得出的結(jié)果有:1.基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)在草本植物中的研究規(guī)律,嘗試建立在柑橘中的應(yīng)用體系。借助農(nóng)桿菌介導(dǎo)的枳上胚軸遺傳轉(zhuǎn)化過程,對轉(zhuǎn)化再生過程進(jìn)行優(yōu)化。統(tǒng)計結(jié)果顯示,調(diào)整無菌苗生長時間為42d、農(nóng)桿菌液濃度OD₆₀₀為0.8、轉(zhuǎn)化促進(jìn)物As濃度為30mg/L、外植體選用縱切的切割方法能有效提高抗性芽的再生率。2.利用超表達(dá)融合載體35S::Pt FT-EGFP對栽培型煙草進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,獲得超表達(dá)PtFT的煙草。種植PtFT和CiTFL1的轉(zhuǎn)基因煙草T2代,發(fā)現(xiàn)PtFT能夠明顯促進(jìn)煙草花期提前,同時促進(jìn)植株側(cè)枝發(fā)育,增加開花結(jié)實的數(shù)量。發(fā)現(xiàn)CiTFL1在枳不同組織中差異表達(dá),且能夠顯著延遲栽培型煙草的開... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

經(jīng)典CRISPR位點(diǎn)結(jié)構(gòu)

quence)處于 CRISPR 位點(diǎn)的第一個重復(fù)序列的上游位置，他能驅(qū)動 CRISPR的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生非編碼的 cr RNAs ，形成的 cr RNA 和 Cas 基因表達(dá)的 Cas 蛋白參與 CRISPR 免疫防御過程(李君 2013)。靶基因與間隔序列之間有很高的性，可被特異性識別(李君 2013)。CRISPR 結(jié)構(gòu)由 3' 端的 CRISPR 基因座 5'端的 tracr RNA(Trans-activating cr RNA)基因組成，后者與 cr RNA 形成 NA：tracr RNA 復(fù)合體，該復(fù)合體能夠幫助 Cas9 蛋白實現(xiàn)特異性識別，而r RNA：tracr RNA 復(fù)合體與 Cas9 蛋白相結(jié)合，共同發(fā)揮核酸酶切割 DNA 的；加之 3'端的 CRISPR 基因座包含啟動子區(qū)域、大量間隔序列和重復(fù)序列順成了一套完整且保守的免疫防御體系(Karginov FV and Hannon GJ 2010)。其型間隔序列毗鄰基序(Protospacer adjacent motif, PAM)協(xié)助 Cas9 蛋白準(zhǔn)確的非自身 DNA 片段。而宿主菌 CRISPR 基因座的間隔序列臨近位置上并沒有AM 從而避免發(fā)生自身切割(Semenova E et al 2009)。

pKSE401質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禾谷類作物胚乳淀粉合成及Waxy基因研究進(jìn)展[J]. 李祥棟,石明,魏心元.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2015(12)
[2]CRISPR/Cas基因編輯系統(tǒng)及其在植物中的研究進(jìn)展[J]. 趙欣,胡軍.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2015(12)
[3]CRISPR/Cas:新一代基因編輯技術(shù)[J]. 黃妤,王世春.  生命的化學(xué). 2015(01)
[4]CRISPR/Cas系統(tǒng):RNA靶向的基因組定向編輯新技術(shù)[J]. 李君,張毅,陳坤玲,單奇?zhèn)?王延鵬,梁振,高彩霞.  遺傳. 2013(11)
[5]CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)編輯技術(shù)[J]. 方銳,暢飛,孫照霖,李寧,孟慶勇.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2013(08)



本文編號：3299873