研究背景:動(dòng)脈粥樣硬化主要是由血脂的不平衡引起的,特別是低密度脂蛋白代謝障礙。載脂蛋白E（ApoE）和低密度脂蛋白受體（LDLR）基因突變?cè)趧?dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著十分重要的作用。ApoE蛋白的功能缺陷會(huì)導(dǎo)致Ⅲ型高脂蛋白血癥（HLPⅢ）。肝細(xì)胞表面的LDLR蛋白對(duì)于肝臟中膽固醇（LDL-C）的清除起著至關(guān)重要的作用,LDLR基因功能的缺失導(dǎo)致在血液循環(huán)中過(guò)度積累LDL-C,并引起家族性高膽固醇血癥（FH）。在動(dòng)脈粥樣硬化的研究中,廣泛使用的模式動(dòng)物主要有大鼠、小鼠及倉(cāng)鼠。然而,鼠的外形和新陳代謝與人類相差很大,且鼠不會(huì)自發(fā)發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化,且形成斑塊后不會(huì)斑塊破裂。與此同時(shí),豬被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)和人類疾病研究,并且小型豬在冠狀動(dòng)脈解剖學(xué)、血流動(dòng)力學(xué)、血脂蛋白表達(dá)譜等方面與人類有很高的相似性,能夠模擬人類易損斑塊形成和進(jìn)展、自發(fā)性斑塊破裂伴血栓形成,是構(gòu)建動(dòng)脈粥樣硬化大動(dòng)物模型的理想試驗(yàn)動(dòng)物。目的:通過(guò)同時(shí)敲除巴馬小型豬的ApoE、LDLR兩個(gè)基因,使動(dòng)物自發(fā)產(chǎn)生高脂血癥,擬建立一種易損斑塊形成發(fā)生率高、試驗(yàn)周期短、操作簡(jiǎn)便且穩(wěn)定的動(dòng)脈易損斑塊動(dòng)物模型。為研究動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病... 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CRISPR/Cas9打靶序列設(shè)計(jì)

南京醫(yī)科用 BbsⅠ酶切 pX330，使質(zhì)粒線性化（圖 2A）。切膠330 質(zhì)粒，與退火的 sgRNA 重新連接，送南京思普金6 引物測(cè)序，鑒定結(jié)果為 sgRNA 成功連接進(jìn)入 pX33

重構(gòu)Cas9打靶質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果A、B分別為L(zhǎng)DLR的sgRNA1、sgRNA2與pX330連接后測(cè)序結(jié)果；C為ApoE的sgRNA與pX330連接后測(cè)序結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型構(gòu)建[J]. 梁璐,洪瑞云,周敏,張毅,鄒海林,鐘一鳴,王烈峰.  贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2017(03)
[2]高脂飲食結(jié)合球囊損傷快速建立ApoE-/-大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型[J]. 楊炯,張耀雷,代鳳丹,韋舒杰,王強(qiáng),李德,楊大春.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2016(12)
[3]金黃地鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型的病理觀察和生化指標(biāo)分析[J]. 馬寧,楊亞軍,劉希望,秦哲,孔曉軍,李世宏,李劍勇.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2016(09)
[4]HDL signaling and protection against coronary artery atherosclerosis in mice[J]. Bernardo L Trigatti,Mark Fuller.  The Journal of Biomedical Research. 2016(02)
[5]Synergistic anticancer properties of docosahexaenoic acid and 5-fluorouracil through interference with energy metabolism and cell cycle arrest in human gastric cancer cell line AGS cells[J]. Kun Gao,Qi Liang,Zhi-Hao Zhao,You-Fen Li,Shu-Feng Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2016(10)
[6]Inflammation, oxidative stress and renin angiotensin system in atherosclerosis[J]. Kazim Husain,Wilfredo Hernandez,Rais A Ansari,Leon Ferder.  World Journal of Biological Chemistry. 2015(03)
[7]Generation of B Cell-Deficient Pigs by Highly Efficient CRISPR/Cas9-Mediated Gene Targeting[J]. Fengjiao Chen,Ying Wang,Yilin Yuan,Wei Zhang,Zijian Ren,Yong Jin,Xiaorui Liu,Qiang Xiong,Qin Chen,Manling Zhang,Xiaokang Li,Lihua Zhao,Ze Li,Zhaoqiang Wu,Yanfei Zhang,Feifei Hu,Juan Huang,Rongfeng Li,Yifan Dai.  Journal of Genetics and Genomics. 2015(08)
[8]轉(zhuǎn)導(dǎo)骨橋蛋白短發(fā)夾狀RNA預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化模型兔血管成形后的再狹窄[J]. 孫玉梅,張金盈,閆繼鋒,袁斌,楊鵬偉,李文,于運(yùn)福.  中國(guó)組織工程研究. 2014(18)
[9]中國(guó)心腦血管疾病死亡現(xiàn)況及流行趨勢(shì)[J]. 張嘯飛,胡大一,丁榮晶,王卉呈,顏流霞.  中華高血壓雜志. 2012(06)
[10]基因修飾豬作為人類疾病模型的研究進(jìn)展[J]. 楊化強(qiáng),賴良學(xué).  科技導(dǎo)報(bào). 2011(30)



本文編號(hào)：3281236