D-阿洛酮糖是一種自然界天然存在含量極少的稀有糖。D-阿洛酮糖具有零能量且與蔗糖相似的甜度和良好的加工特性,以及預(yù)防肥胖、降血脂、抗氧化、保護神經(jīng)和抑制癌細(xì)胞等生理活性,在食品衛(wèi)生和保健醫(yī)藥等領(lǐng)域具有巨大應(yīng)用價值。全細(xì)胞反應(yīng)可避免多步操作和耗時的酶純化過程,然而,D-阿洛酮糖-3-差向異構(gòu)酶在高溫下進行催化反應(yīng),催化結(jié)束后,常規(guī)的宿主如大腸桿菌、釀酒酵母等容易死亡,難以重復(fù)利用。為實現(xiàn)工程菌原位催化后的重復(fù)利用,本研究通過克隆D-阿洛酮糖-3-差向異構(gòu)酶基因,構(gòu)建高效表達載體,轉(zhuǎn)入耐熱的馬克斯克魯維酵母中成功實現(xiàn)了高效表達,通過全細(xì)胞反應(yīng),研究工程菌原位催化特性,采用生物法脫除混合液中的D-果糖,降低生產(chǎn)成本,提高工程菌的重復(fù)利用及D-阿洛酮糖的生產(chǎn)效率,初步論證工程菌再生循環(huán)催化D-果糖產(chǎn)D-阿洛酮糖的可行性,主要結(jié)果如下:（1）D-阿洛酮糖-3-差向異構(gòu)酶基因的克隆及分析。以根癌農(nóng)桿菌基因組DNA為模板,通過PCR擴增方法獲得目的基因,將其與T克隆載體連接,構(gòu)建p UCm-T-dpe重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α,抽取質(zhì)粒測序驗證并分析。同源性分析顯示,該基因與NCBI數(shù)據(jù)庫中根癌... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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D-阿洛酮糖（橙色）和D-果糖（綠色）的結(jié)構(gòu)

合肥工業(yè)大學(xué)專業(yè)碩士研究生學(xué)位論文量的 D-阿洛酮糖，小腸內(nèi)的吸收可達 66.2%-80%，類似赤蘚糖醇在小腸內(nèi)的吸收率。但 D-阿洛酮糖的攝入經(jīng)小腸吸收后不能代謝產(chǎn)生能量，不存在碳水化合物的能量增加，并且不會影響血糖和胰島素水平[8]。即使是一小部分 D-阿洛酮糖到達大腸，仍然不能通過盲腸微生物降解[9]。

圖 1.3 A.tumefaciens DPEase 和單體的分子結(jié)構(gòu)Fig 1.3 Molecular structure and monomer of A. tumefaciens DPEase圖 1.4 A.tumefaciens DPEase 的二級結(jié)構(gòu)圖中，H1，H2，…H13 標(biāo)記表示 α-螺旋；A，B，…標(biāo)記表達 β-折疊；γ 表示 γ-轉(zhuǎn)角Fig 1.4 The secondary structure of A. tumefaciens DPEase

【參考文獻】：
期刊論文
[1]芽胞桿菌高效分泌表達異源蛋白的研究進展[J]. 王培立,王平,田健,伍寧豐,姚斌.  生物技術(shù)進展. 2015(02)
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[3]低熱量甜味劑D-阿洛酮糖的生產(chǎn)應(yīng)用研究進展[J]. 帥玉英,孫怡,吳曉花,顧欽青,沈宇峰,李佶松.  中國食品添加劑. 2014(09)
[4]生物轉(zhuǎn)化法產(chǎn)D-阿洛糖的分離純化[J]. 馮再平,沐萬孟,江波,張濤,薛冬.  食品工業(yè)科技. 2014(22)
[5]Clostridium scindens ATCC35704中的D-塔格糖-3-差向異構(gòu)酶的克隆表達、純化及活性研究[J]. 邢慶超,沐萬孟,江波,周榴明,張濤.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2011(08)
[6]D-阿洛酮糖的分離純化[J]. 邢慶超,沐萬孟,江波,周榴明,儲菲菲,張濤.  食品工業(yè)科技. 2011(09)

碩士論文
[1]D-阿洛酮糖3-差向異構(gòu)酶的表達及其固定化轉(zhuǎn)化D-阿洛酮糖的研究[D]. 李曉波.天津科技大學(xué) 2013



本文編號：3279009