TCP基因家族是bHLH家族中特殊的一類轉(zhuǎn)錄因子。bHLH功能域由50-60個(gè)氨基酸組成,這些氨基酸分成明顯的兩部分:長(zhǎng)度為10至15個(gè)氨基酸的堿性區(qū)和40個(gè)氨基酸左右的a-helix-100p-a-helix區(qū)（HLH區(qū)）。TCP家族被分為兩個(gè)亞家族classI和classlI。根據(jù)TCP基因結(jié)構(gòu)的不同差異,classlI又被細(xì)分成為ECE和CIN兩支,其中CYCl類、CYC2類和CYC3類三個(gè)亞簇同屬于ECE支。矮牽牛PhTCP3和PhTCP4屬于CYC1類基因。在植物生長(zhǎng)發(fā)育和形態(tài)發(fā)生作用的過(guò)程中,TCP基因家族主要參與花對(duì)稱發(fā)育,調(diào)控植物結(jié)構(gòu),控制葉形態(tài),衰老,參與胚胎發(fā)育,調(diào)節(jié)生理等方面。其中CYCl類基因的主要功能是主要調(diào)控植物的分枝。目前,對(duì)CYCl支的研究較多的是擬南芥的BRCl,它在MAX途徑的下游參與調(diào)控腋芽的生長(zhǎng),參與生長(zhǎng)素調(diào)控頂端優(yōu)勢(shì)以及調(diào)控分枝發(fā)育;在番茄中過(guò)量表達(dá)SIBRClb基因植株分枝明顯減少,而基因沉默后表型觀察分枝增多顯著;在豌豆中PsBRCl基因的突變體分枝明顯增加。本文通過(guò)對(duì)PhTCP3和PhTCP4基因的超表達(dá)以及敲除植株的表型（包括側(cè)枝的分枝... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Ⅱ型CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用示意圖

微鏡將觀察細(xì)胞并選擇清晰的視野進(jìn)行拍照，同時(shí)添加標(biāo)尺，為細(xì)胞的測(cè)量備。(3)葉片下表皮細(xì)胞大小的測(cè)量利用軟件 Image J 測(cè)量細(xì)胞大小,選擇邊界清晰的細(xì)胞，勾出細(xì)胞大小的，用 ctrl+D 固定，Ctrl+M 測(cè)量，Alt+D 標(biāo)號(hào)以防重復(fù)。3.3 結(jié)果與分析3.3.1pGMFTCP3 轉(zhuǎn)基因植株的獲得前期收獲 pGMFTCP3 轉(zhuǎn)基因植株的后代經(jīng)鑒定實(shí)際上是 PhTCP3 SDRX 因的后代，所以要重新進(jìn)行 pGMFTCP3 的轉(zhuǎn)基因工作。3.3.1.1pGMFTCP3 農(nóng)桿菌菌液檢測(cè)用 513QF 作為上游引物和 504QR 作為下游引物對(duì)農(nóng)桿菌進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增， 1000bp 左右的片段（圖 3-1 左），以及用 SOUPF 作為上游引物和 SOUPR 下游引物對(duì)農(nóng)桿菌進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，得到 750bp 左右的片段（圖 3-1 右）。

采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法將含有表達(dá)載體 pGMFTCP3 質(zhì)粒的農(nóng)桿牛 MD，具體步驟見 3.2.4，大約 15d 之后，未轉(zhuǎn)入基因的葉片部位圖 A），轉(zhuǎn)入基因的部位分化出愈傷組織，將愈傷組織切下更換培養(yǎng)右便開始長(zhǎng)芽（圖 B），待芽長(zhǎng)到 2～3 cm 時(shí)切下，更換至含有抗性基 MS6 中。將每個(gè)愈傷上生長(zhǎng)的苗子編為 1 個(gè)遺傳轉(zhuǎn)化系。通過(guò) B篩選，抗性植株能夠正常生根，而非抗性植株則不生根（圖 C）。上述實(shí)驗(yàn)因轉(zhuǎn)化效率很低一共重復(fù)做了 4 次，在篩選分化培養(yǎng) 15 時(shí)期的愈傷組織，不定芽和抗性植株進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。pGMFTCP3 第一次共侵染了 101 塊葉盤，得到了 5 塊愈傷組織，3 塊長(zhǎng)出了不定芽，沒植株，第二次轉(zhuǎn)化矮牽牛共侵染了 105 塊葉盤，得到了 8 塊愈傷組織 不定芽，得到了 1 株抗性植株，第三次轉(zhuǎn)化矮牽牛共侵染了 123 塊葉 25 塊愈傷組織，10 塊長(zhǎng)出了不定芽，得到 2 株抗性植株，第四次轉(zhuǎn)侵染了 102 個(gè)塊葉盤，得到了 7 塊愈傷組織，3 塊長(zhǎng)出了不定芽，得性植株。四次一共侵染了 431 塊葉盤，篩選得到 45 塊抗性愈傷組織不定芽，最終篩選出 4 個(gè)抗性株系。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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