茶樹中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因CsINV10的克隆與表達(dá)分析
發(fā)布時間：2021-06-26 05:43
基于課題組前期對茶樹冷馴化系統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄組測序分析結(jié)果,從中挑選出6條與中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因高度相似的EST序列,電子拼接和RT-PCR驗證后獲得一條全長為2101 bp的核酸序列。該基因包含1923 bp的ORF,編碼640個氨基酸,蛋白分子量為71.8 kD,理論等電點為5.69。根據(jù)BlastX同源性比對顯示,該基因與荔枝LcNI相似性最高（80%）,為G100家族成員,屬于中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因,將其命名為CsINV10（GenBank登錄號為KT359348）。對CsINV10氨基酸序列的系統(tǒng)進化樹分析顯示,其與木薯MeNINV8親緣關(guān)系最近。進一步分析顯示,CsINV10的氨基酸序列無N端信號肽,無跨膜結(jié)構(gòu)域,屬于親水性蛋白,并定位在葉綠體上。熒光定量PCR分析表明,CSINV10具有組織表達(dá)特異性,在茶樹葉和花中的表達(dá)量最高,根系中最低。分析發(fā)現(xiàn),低溫（4℃）、干旱和鹽脅迫分別處理茶樹1 d后,成熟葉片中CsINV10的表達(dá)呈逐漸上升趨勢;而在ABA條件處理下,該基因呈先升高后降低趨勢,在處理5 d后基本不表達(dá),表明該基因可能參與茶樹對多種逆境脅迫的響應(yīng),這為后續(xù)進一步研究轉(zhuǎn)化...
【文章來源】：作物學(xué)報. 2016,42(03)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：13 頁
【部分圖文】：
茶樹中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因CsINV10RT-PCR電泳結(jié)果Fig.1Electrophoresisresultofneutral/alkalineinvertasegeneCsINV10inteaplant
第3期錢文俊等:茶樹中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因CsINV10的克隆與表達(dá)分析383圖5CsINV10親水性/疏水性分析Fig.5Hydrophobicity/hydrophilicityanalysisofCsINV10圖6CsINV10蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測Fig.6PredictionmodelfortransmenbranedomainofCsARF1protein圖7CsINV10磷酸化位點預(yù)測Fig.7PhosphorylationsitespredictionofCsINV10protein圖8CsINV10糖基化位點預(yù)測Fig.8GlycosylationsitespredictionofCsINV10protein2.6CsINV10基因的表達(dá)模式分析2.6.1組織表達(dá)差異性圖10表明,CsINV10基因在成熟葉片和花中的表達(dá)要明顯高于根系中的表達(dá),莖干中的表達(dá)量較成熟葉片和花都要低,但也比根系中高,說明該基因在茶樹中具有組織表達(dá)特異性。2.6.2不同非生物脅迫下的表達(dá)模式NaCl處理下,茶樹成熟葉片中CsINV10基因表達(dá)量隨著處理時間的延長呈逐漸升高趨勢(圖11),在處理5d后,其表達(dá)量為未處理前的13倍,差異達(dá)到顯著水平。PEG條件下,葉片中該基因的表達(dá)量在處理后3h達(dá)到最大值,是處理前的5.3倍,隨后又逐漸降低并在處理后1d達(dá)到最小值,而后隨著處理時間的延長,表達(dá)又逐漸升高,在處理5d后其表達(dá)量又基本恢復(fù)到處理3h的水平。ABA處理下,該基因表達(dá)量在處理后3h達(dá)到最大值,隨后隨著處理時間的延長呈現(xiàn)逐步降低的趨勢。低溫條件下,CsINV10基因在茶樹成熟葉中的表達(dá)隨著處理時間的延長呈現(xiàn)
第3期錢文俊等:茶樹中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因CsINV10的克隆與表達(dá)分析383圖5CsINV10親水性/疏水性分析Fig.5Hydrophobicity/hydrophilicityanalysisofCsINV10圖6CsINV10蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測Fig.6PredictionmodelfortransmenbranedomainofCsARF1protein圖7CsINV10磷酸化位點預(yù)測Fig.7PhosphorylationsitespredictionofCsINV10protein圖8CsINV10糖基化位點預(yù)測Fig.8GlycosylationsitespredictionofCsINV10protein2.6CsINV10基因的表達(dá)模式分析2.6.1組織表達(dá)差異性圖10表明,CsINV10基因在成熟葉片和花中的表達(dá)要明顯高于根系中的表達(dá),莖干中的表達(dá)量較成熟葉片和花都要低,但也比根系中高,說明該基因在茶樹中具有組織表達(dá)特異性。2.6.2不同非生物脅迫下的表達(dá)模式NaCl處理下,茶樹成熟葉片中CsINV10基因表達(dá)量隨著處理時間的延長呈逐漸升高趨勢(圖11),在處理5d后,其表達(dá)量為未處理前的13倍,差異達(dá)到顯著水平。PEG條件下,葉片中該基因的表達(dá)量在處理后3h達(dá)到最大值,是處理前的5.3倍,隨后又逐漸降低并在處理后1d達(dá)到最小值,而后隨著處理時間的延長,表達(dá)又逐漸升高,在處理5d后其表達(dá)量又基本恢復(fù)到處理3h的水平。ABA處理下,該基因表達(dá)量在處理后3h達(dá)到最大值,隨后隨著處理時間的延長呈現(xiàn)逐步降低的趨勢。低溫條件下,CsINV10基因在茶樹成熟葉中的表達(dá)隨著處理時間的延長呈現(xiàn)
【參考文獻】：
期刊論文
[1]茶樹谷胱甘肽還原酶基因CsGRs的克隆與表達(dá)分析[J]. 岳川,曹紅利,周艷華,王璐,郝心愿,王新超,楊亞軍. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(16)
[2]甘蔗中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因SoNIN1的克隆和表達(dá)分析[J]. �？∑�,王愛勤,黃靜麗,楊麗濤,李楊瑞. 作物學(xué)報. 2014(02)
[3]茶樹膽堿單加氧酶CsCMO的克隆及甜菜堿合成關(guān)鍵基因的表達(dá)分析[J]. 曹紅利,岳川,郝心愿,王新超,楊亞軍. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(15)
碩士論文
[1]枳中性轉(zhuǎn)化酶基因PtrNINV克隆及其功能分析[D]. 王菲.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
本文編號：3250744
【文章來源】：作物學(xué)報. 2016,42(03)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：13 頁
【部分圖文】：
茶樹中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因CsINV10RT-PCR電泳結(jié)果Fig.1Electrophoresisresultofneutral/alkalineinvertasegeneCsINV10inteaplant
第3期錢文俊等:茶樹中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因CsINV10的克隆與表達(dá)分析383圖5CsINV10親水性/疏水性分析Fig.5Hydrophobicity/hydrophilicityanalysisofCsINV10圖6CsINV10蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測Fig.6PredictionmodelfortransmenbranedomainofCsARF1protein圖7CsINV10磷酸化位點預(yù)測Fig.7PhosphorylationsitespredictionofCsINV10protein圖8CsINV10糖基化位點預(yù)測Fig.8GlycosylationsitespredictionofCsINV10protein2.6CsINV10基因的表達(dá)模式分析2.6.1組織表達(dá)差異性圖10表明,CsINV10基因在成熟葉片和花中的表達(dá)要明顯高于根系中的表達(dá),莖干中的表達(dá)量較成熟葉片和花都要低,但也比根系中高,說明該基因在茶樹中具有組織表達(dá)特異性。2.6.2不同非生物脅迫下的表達(dá)模式NaCl處理下,茶樹成熟葉片中CsINV10基因表達(dá)量隨著處理時間的延長呈逐漸升高趨勢(圖11),在處理5d后,其表達(dá)量為未處理前的13倍,差異達(dá)到顯著水平。PEG條件下,葉片中該基因的表達(dá)量在處理后3h達(dá)到最大值,是處理前的5.3倍,隨后又逐漸降低并在處理后1d達(dá)到最小值,而后隨著處理時間的延長,表達(dá)又逐漸升高,在處理5d后其表達(dá)量又基本恢復(fù)到處理3h的水平。ABA處理下,該基因表達(dá)量在處理后3h達(dá)到最大值,隨后隨著處理時間的延長呈現(xiàn)逐步降低的趨勢。低溫條件下,CsINV10基因在茶樹成熟葉中的表達(dá)隨著處理時間的延長呈現(xiàn)
第3期錢文俊等:茶樹中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因CsINV10的克隆與表達(dá)分析383圖5CsINV10親水性/疏水性分析Fig.5Hydrophobicity/hydrophilicityanalysisofCsINV10圖6CsINV10蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測Fig.6PredictionmodelfortransmenbranedomainofCsARF1protein圖7CsINV10磷酸化位點預(yù)測Fig.7PhosphorylationsitespredictionofCsINV10protein圖8CsINV10糖基化位點預(yù)測Fig.8GlycosylationsitespredictionofCsINV10protein2.6CsINV10基因的表達(dá)模式分析2.6.1組織表達(dá)差異性圖10表明,CsINV10基因在成熟葉片和花中的表達(dá)要明顯高于根系中的表達(dá),莖干中的表達(dá)量較成熟葉片和花都要低,但也比根系中高,說明該基因在茶樹中具有組織表達(dá)特異性。2.6.2不同非生物脅迫下的表達(dá)模式NaCl處理下,茶樹成熟葉片中CsINV10基因表達(dá)量隨著處理時間的延長呈逐漸升高趨勢(圖11),在處理5d后,其表達(dá)量為未處理前的13倍,差異達(dá)到顯著水平。PEG條件下,葉片中該基因的表達(dá)量在處理后3h達(dá)到最大值,是處理前的5.3倍,隨后又逐漸降低并在處理后1d達(dá)到最小值,而后隨著處理時間的延長,表達(dá)又逐漸升高,在處理5d后其表達(dá)量又基本恢復(fù)到處理3h的水平。ABA處理下,該基因表達(dá)量在處理后3h達(dá)到最大值,隨后隨著處理時間的延長呈現(xiàn)逐步降低的趨勢。低溫條件下,CsINV10基因在茶樹成熟葉中的表達(dá)隨著處理時間的延長呈現(xiàn)
【參考文獻】：
期刊論文
[1]茶樹谷胱甘肽還原酶基因CsGRs的克隆與表達(dá)分析[J]. 岳川,曹紅利,周艷華,王璐,郝心愿,王新超,楊亞軍. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(16)
[2]甘蔗中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因SoNIN1的克隆和表達(dá)分析[J]. �？∑�,王愛勤,黃靜麗,楊麗濤,李楊瑞. 作物學(xué)報. 2014(02)
[3]茶樹膽堿單加氧酶CsCMO的克隆及甜菜堿合成關(guān)鍵基因的表達(dá)分析[J]. 曹紅利,岳川,郝心愿,王新超,楊亞軍. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(15)
碩士論文
[1]枳中性轉(zhuǎn)化酶基因PtrNINV克隆及其功能分析[D]. 王菲.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
本文編號：3250744
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