發(fā)布時間：2021-06-24 05:46

　　油松（Pinus tabulaeformis Carr.）是我國特有的綠化和造林樹種,研究其胚珠發(fā)育的調(diào)控機制,對提高油松種子的產(chǎn)量和質(zhì)量有著重要的理論和實踐意義。研究表明,植物胚珠發(fā)育是基因在時空上順序表達的結(jié)果,而基因表達調(diào)控受體內(nèi)外多種因素的影響。近年來越來越多的實驗證據(jù)表明,微衛(wèi)星序列（SSR）是體內(nèi)參與基因表達調(diào)控的重要因素之一。遼寧興城油松種子園內(nèi)的28號無性系雌配子體游離核在早期停止分裂,而導(dǎo)致胚珠敗育。為研究該雌性不育系游離核停止分裂的原因,課題組分別對油松雌配子體游離核分裂不同時期的可育系與不育系胚珠的轉(zhuǎn)錄組進行了高通量測序,共得到63449個相關(guān)Unigene。本研究在此基礎(chǔ)上,進行了轉(zhuǎn)錄組微衛(wèi)星特征分析,并篩選育性相關(guān)的微衛(wèi)星標記,對目標基因在兩系胚珠發(fā)育不同階段的表達規(guī)律進行了分析。主要結(jié)果如下：1.用MISA軟件對轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行SSR位點的發(fā)掘和分析,得到了1412個SSR位點,存在于1274條序列中,平均每2.15 kb出現(xiàn)一個SSR。結(jié)果表明,油松胚珠轉(zhuǎn)錄組微衛(wèi)星中存在87種重復(fù)基元,其中（A/T）n比例最高,約占45.89%；出現(xiàn)頻率較高的重復(fù)類型是單核... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
1 文獻綜述
    1.1 油松雌性不育研究進展
        1.1.1 油松胚珠發(fā)育的細胞學(xué)研究
        1.1.2 油松胚珠發(fā)育的生理生化研究
        1.1.3 油松胚珠發(fā)育的蛋白質(zhì)組學(xué)研究
        1.1.4 油松胚珠發(fā)育的分子生物學(xué)研究
    1.2 高通量測序技術(shù)
        1.2.1 新一代測序技術(shù)簡介
        1.2.2 新一代測序技術(shù)的應(yīng)用
        1.2.3 第三代測序技術(shù)
    1.3 轉(zhuǎn)錄組與轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)(RNA-seq)
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄組
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的發(fā)展
        1.3.3 轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)
    1.4 微衛(wèi)星分子標記技術(shù)
        1.4.1 分子標記技術(shù)
        1.4.2 微衛(wèi)星標記簡介
        1.4.3 微衛(wèi)星序列分布特點
        1.4.4 微衛(wèi)星標記的優(yōu)勢及應(yīng)用
        1.4.5 高通量測序技術(shù)在微衛(wèi)星標記中的應(yīng)用
    1.5 研究背景、目的及內(nèi)容
2 油松胚珠轉(zhuǎn)錄組微衛(wèi)星特征分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 數(shù)據(jù)來源及材料
        2.1.2 數(shù)據(jù)處理
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 微衛(wèi)星重復(fù)分布概況及重復(fù)基元的分布
        2.2.2 微衛(wèi)星在編碼區(qū)中的分布
        2.2.3 微衛(wèi)星的長度分布
        2.2.4 微衛(wèi)星序列表達水平(RPKM)分析
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
3 油松胚珠育性相關(guān)微衛(wèi)星標記開發(fā)
    3.1 材料采集
        3.1.1 材料
        3.1.2 試劑
    3.2 方法
        3.2.1 油松DNA提取
        3.2.2 特異序列篩選
        3.2.3 SSR引物設(shè)計
        3.2.4 PCR擴增
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 從不同組織提取的DNA質(zhì)量比較
        3.3.2 DNA質(zhì)量檢測
        3.3.3 PCR擴增結(jié)果分析
    3.4 小結(jié)
4 不育系特異表達基因的相對定量分析
    4.1 實時定量PCR相對定量及2-△△CT法
    4.2 材料與試劑
        4.2.1 材料
        4.2.2 試劑
    4.3 方法
        4.3.1 RNA提取
        4.3.2 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        4.3.3 引物設(shè)計
        4.3.4 實時定量PCR反應(yīng)
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 RNA提取結(jié)果
        4.4.2 定量PCR產(chǎn)物特異性
        4.4.3 目標基因表達量
    4.5 小結(jié)
5 結(jié)論
參考文獻
個人簡介
導(dǎo)師簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[8]大黃魚脾臟轉(zhuǎn)錄組和表達譜分析以及過氧化物酶4結(jié)構(gòu)與功能研究[D]. 母尹楠.國家海洋局第三海洋研究所 2011
[9]油松胚珠游離核時期消減雜交文庫的構(gòu)建[D]. 徐利利.北京林業(yè)大學(xué) 2010
[10]油松胚珠游離核分裂期miRNA的克隆與初步鑒定[D]. 趙百慧.北京林業(yè)大學(xué) 2010



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