發(fā)布時(shí)間：2021-06-22 02:39

　　質(zhì)體中葉綠素的生物合成是植物光合器官發(fā)育的關(guān)鍵過程,其中原葉綠素酸酯到葉綠素酸酯的還原是葉綠素生物合成的關(guān)鍵限速步驟,這一反應(yīng)由非光依賴性原葉綠素酸酯還原酶（dark-operative protochlorophyllide reductase,DPOR）和光依賴性原葉綠素酸酯還原酶（light-dependent protochlorophyllidereductase,LPOR）兩種酶催化。被子植物僅含有LPOR一種還原酶,因此無法在黑暗條件下合成葉綠素。由于DPOR和LPOR的共存,黑暗條件下生長的杉木（Cunninghamia lanceolata L.）子葉是綠色的。然而,黑暗條件下生長的杉木頂芽卻呈現(xiàn)黃化狀態(tài),這是與子葉完全不同的現(xiàn)象。因此,本研究選取杉木頂芽為實(shí)驗(yàn)材料,通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序并結(jié)合分子生物學(xué)的方法,對(duì)光照和黑暗條件下生長的杉木頂芽基因的表達(dá)情況進(jìn)行深入研究。主要結(jié)果如下:（1）與光照條件下生長的杉木頂芽相比,黑暗條件下的頂芽中DPOR三個(gè)亞基的編碼基因chlB,chlL和chlN以及LPOR的編碼基因POR的表達(dá)顯著下調(diào),葉綠素的生物合成受到抑制因而黑暗條件下的... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１光照條件下和黑暗條件下生長的杉木頂芽的葉綠索介成

?３實(shí)驗(yàn)結(jié)果???３．１．２原葉綠素酸酯還原酶編碼基因的表達(dá)水平??為了確定編碼ＤＰＯＲ和ＬＰＯＲ的基因表達(dá)水平是否發(fā)生變化，本研宄進(jìn)行了??ｑＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)。首先分別提取光照和黑暗條件下生長的杉木頂芽的ＲＮＡ，結(jié)果如圖??３．２ａ所示，提取結(jié)果完整，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將所提ＲＮＡ進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的ｃＤＮＡ??通過內(nèi)參基因ＧＪＰＤ／／進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖３．２ｂ，可用于下一步實(shí)驗(yàn)。??圖３．２?ＲＮＡ電泳檢測(cè)和ｃＤＮＡ的內(nèi)參基因Ｇ＾Ｐ￡）／／驗(yàn)證圖??注：ＤＧ：黑暗條件下生長的杉木頂芽；ＬＧ：光照條件下生長的杉木頂芽。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２?Ｔｈｅ?ｇｒａｐｈ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ａｎｄ?ＲＴ－ＰＣＲ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｂｙ?ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ??ｇｅｎｅ?ＧＡＰＤＨ??Ｎｏｔｅｓ：?ＤＧ：?ｄａｒｋ－ｇｒｏｗｎ?Ｃｈｉｎｅｓｅ?ｆｉｒ?ｓｐｒｏｕｔｓ；?ＬＧ：?ｌｉｇｈｔ－ｇｒｏｗｎ?Ｃｈｉｎｅｓｅ?ｆｉｒ?ｓｐｒｏｕｔｓ．??根據(jù)ＮＣＢＩ數(shù)據(jù)庫（ＫＣ４２７２７０．１）和本課題組前期研究結(jié)果（ＸｕｅａｎｄＷａｎｇｅｔａｌ．，??２０１７）中記錄的基因序列，設(shè)計(jì)了尸０／？，ｃ／？／５，?ｃＡ／Ｚ和ｃ／ｚ／�；虻囊铮ǜ戒洠粒�。??ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果顯示，與光照條件下的頂芽相比，黑暗條件下的頂芽中的相對(duì)表??達(dá)量顯著下調(diào)，大約是光照條件的五分之一；Ｍ／５，?的表達(dá)均被顯著抑??制，其中ｃ／ｚ／５的相對(duì)表達(dá)量約為光照條件的五分之一，而ｃ／ｚ／Ｌ和ｃ／ｚ／Ｗ的表達(dá)量在??該ｑＲＴ－ＰＣＲ系統(tǒng)中幾乎檢測(cè)不到（圖３．３）。通過對(duì)比杉木頂芽和子葉中編碼Ｐｃｈｌｉｄｅ??還原酶

?光照和黑暗條件下生長的杉木頂芽的盛因表達(dá)分析???■?ｌｉｇｈｔ－ｇｒｏｗｎ?■?ｄａｒｋ－ｇｒｏｗｎ??：１．４０??Ｉ：：：?｜?｜?｜?．??ｉｅＬＬ?ｌｉ?Ｌ?Ｌ??ＰＯＲ?ｃｈ／Ｂ?ｃｈｌＬ?ｃｈｌＮ??圖３．３光照條件和黑暗條件下生於的頂芽中編碼Ｐｃｈｌｉｄｅ還原酶的坫Ｗ的相對(duì)表達(dá)水??注：Ｗ）／？足編碼ＬＰＯＲ的基因；Ｍ／ｆｉ，?Ｍ／／Ｖ，?Ｍ／人足編碼ＤＰＯＲ二：個(gè)業(yè)駐的娃丨大１。＊＊，／）＜０．０１。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．３?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｇｅｎｅｓ?ｅｎｃｏｄｉｎｇ?Ｐｃｈｌｉｄｅ?ｒｅｄｕｃｔａｓｅ?ｉｎ?ｌｉｇｈｔ－?ａｎｄ??ｄａｒｋ－ｇｒｏｗｎ?ｓｐｒｏｕｔｓ．??Ｎｏｔｅｓ：?ＰＯＲ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｅｎｃｏｄｉｎｇ?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ＬＰＯＲ?；?ｃｈｌＢ，?ｃｈｌＮ，?ｃｈｌＬ?ａｒｅ?ｔｈｅ?ｅｎｃｏｄｉｎｇ?ｇｅｎｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｈｒｅｅ??ｓｕｂｕｎｉｔｓ?ｏｆ?ＬＰＯＲ．?＊＊，／？＜?０．０１．??表３．１杉木頂芽和子葉中編碼Ｐｃｈｌｉｄｅ還原酶的基因相對(duì)表達(dá)水平對(duì)比??Ｔａｂｉｃ?３．１?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆｇｅｎｅｓ?ｅｎｃｏｄｉｎｇ?Ｐｃｈｌｉｄｅ?ｒｅｄｕｃｔａｓｅ?ｉｎ?Ｃｈｉｎｅｓｅ??ｆｉｒ?ｓｐｒｏｕｔｓ?ａｎｄ?ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ??頂芽?子葉???ｌ）Ｇ?ＬＧ?ＤＧ?ＬＧ??／Ｙ？尺相對(duì)表達(dá)?Ｍ?０．１９±０．０３＊＊?ｌ．００±０．０３＊＊?０．３１?±０．０１＊＊?ｌ．００±０．０８＊＊??ｔ．／ｊ／ｆｉ?相對(duì)衣達(dá)


本文編號(hào)：3241942