肌肉生長(zhǎng)抑制素（Myostatin,MSTN）是骨骼肌生長(zhǎng)的主要負(fù)調(diào)控因子,由GDF8基因編碼。GDF8基因自然突變或者人為突變的小鼠、豬、牛、羊、狗以及人等,都表現(xiàn)出骨骼肌明顯增大的表型。GDF8基因在各種疾病引起的肌萎縮病癥中,發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。此外,除了對(duì)肌肉生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控,其對(duì)胚胎的發(fā)育、脂肪的生成及骨骼的形成等生理功能,都具有重要的調(diào)節(jié)作用。CRISPR/Cas9系統(tǒng)是源自于細(xì)菌的一種核酸酶與非編碼小RNA構(gòu)成的復(fù)合物,其在真核生物中能夠?qū)μ囟ǖ腄NA序列位點(diǎn)實(shí)行切割,引起DNA雙鏈斷裂（DSBs）,在細(xì)胞自身DNA修復(fù)機(jī)制的作用下,實(shí)現(xiàn)基因編輯。本研究主要是利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)昆明小白鼠（簡(jiǎn)稱小鼠）和新西蘭大白兔（簡(jiǎn)稱大白兔）的GDF8基因進(jìn)行編輯,獲得GDF8基因修飾的小鼠和大白兔個(gè)體。同時(shí),利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)德保豬和水牛的成纖維細(xì)胞和胚胎的GDF8基因進(jìn)行編輯,并獲得GDF8基因編輯的成纖維單細(xì)胞克隆,再通過(guò)胚胎移植生產(chǎn)豬和水牛的GDF8基因編輯的個(gè)體。另外,針對(duì)目前CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)的外源基因的定點(diǎn)插入和精確修復(fù)效率較低的問(wèn)題... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：138 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１ＧＤＦ８基因及ＭＳＴＮ蛋白結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＧＤＦ８?ｇｅｎｅ?ａｎｄ?ＭＳＴＮ?ｐｒｏｔｅｉｎ??

的四面體結(jié)構(gòu)ｔ１４５，１４６３。第一個(gè)ｐ折疊中的Ｃｙｓｌ０７的側(cè)鏈和第二個(gè)（３折疊中Ｃｙｓｌｌ２??的側(cè)鏈與鋅離子分別作用。ａ螺旋中的兩個(gè)氨基酸Ｈｉｓｌ２５和Ｈｉｓｌ２９與鋅離子相??互作用，從而折疊形成了鋅指結(jié)構(gòu)［１４７］（圖２－２）。與其他金屬離子相比，比如鈷??離子，鋅指結(jié)構(gòu)與鋅離子具有更高的親和力但也有研究稱，一些重金屬??８??

ＺＦＰ與ＤＮＡ的相互作用具有多樣性。但事實(shí)上，ＺＦ－ＤＮＡ的相互作用??是由ａ螺旋的Ｎ端部分決定的［１４３］。??圖２－１鋅指的基本結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｔｈｅ?ｓｔｕｒｅｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｚｉｎｃ?Ｆｉｎｇｅｒ??１．２?ＺＦ的結(jié)構(gòu)??鋅指結(jié)構(gòu)域是半胱氨酸（Ｃｙｓ）和組氨酸（Ｈｉｓ）側(cè)鏈的相互協(xié)調(diào)作用，加上??必不可缺少的鋅離子，形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)。鋅離子對(duì)鋅指二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成是十分重??要的。在經(jīng)典的或者非經(jīng)典的鋅指結(jié)構(gòu)中，通常包括兩個(gè)Ｐ折疊和一個(gè)ａ螺旋［１４？。??ＺＩＦ２６８是一種經(jīng)典的鋅指蛋白，其包括三個(gè)能夠緊密結(jié)合ＤＮＡ的鋅指結(jié)構(gòu)，與??其他鋅指蛋白相比，ＺＩＦ２６８與ＤＮＡ的親和性更高［１３４］。所以通常將其作為基因??編輯重組酶ＺＦＮ和ＴＡＬＥＮ的參照。??鋅離子對(duì)鋅指的結(jié)構(gòu)非常重要。鋅離子能夠快速地與蛋白相互作用形成穩(wěn)定??的四面體結(jié)構(gòu)ｔ１４５，１４６３。第一個(gè)ｐ折疊中的Ｃｙｓｌ０７的側(cè)鏈和第二個(gè)（３折疊中Ｃｙｓｌｌ２??的側(cè)鏈與鋅離子分別作用。ａ螺旋中的兩個(gè)氨基酸Ｈｉｓｌ２５和Ｈｉｓｌ２９與鋅離子相??互作用，從而折疊形成了鋅指結(jié)構(gòu)［１４７］（圖２－２）。與其他金屬離子相比，比如鈷??離子

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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