中華蜜蜂（Apis cerana cerana）是我國(guó)特有的優(yōu)良蜜蜂品種,在促進(jìn)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和維持生態(tài)平衡方面發(fā)揮著重要作用。由于對(duì)外界刺激較為敏感,中華蜜蜂受環(huán)境脅迫影響較大,這制約了中華蜜蜂種群的生存與發(fā)展,研究中華蜜蜂的抗逆性能與防御機(jī)制對(duì)于中華蜜蜂種群的持續(xù)健康發(fā)展具有重要意義。泛素結(jié)合酶（Ubiquitin-conjugating enzyme E2,UBE2）在氧化應(yīng)激響應(yīng)、DNA損傷修復(fù)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等多種細(xì)胞活動(dòng)中具有重要功能。本研究以中華蜜蜂為實(shí)驗(yàn)材料,分離得到兩個(gè)泛素結(jié)合酶基因,分別命名為AccUBE2N和AccUBE2G1,并對(duì)它們進(jìn)行功能研究,從分子水平上闡述中華蜜蜂抗逆性能與泛素結(jié)合酶的聯(lián)系,主要研究結(jié)果如下:（1）對(duì)AccUBE2N和AccUBE2G1進(jìn)行序列分析,結(jié)果表明,AccUBE2N的開(kāi)放閱讀框的長(zhǎng)度為456bp,編碼由151個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì),預(yù)測(cè)該蛋白的分子量為17.18kDa,預(yù)測(cè)等電點(diǎn)為5.72;AccUBE2G1的開(kāi)放閱讀框?yàn)?07bp,編碼由168個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì),預(yù)測(cè)分子量為19.28kDa,等電點(diǎn)為4.99。（2）氨基酸序列... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

泛素化示意圖（Yeetal.,2009）

3.1 中華蜜蜂 AccUBE2N 基因的分離與生物信息學(xué)分析3.1.1 AccUBE2N 開(kāi)放閱讀框的分離與序列分析本實(shí)驗(yàn)根據(jù) NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)公布的中華蜜蜂 UBE2N 基因的核苷酸序列（GenBan注冊(cè)號(hào)：NW_016018011.1），設(shè)計(jì)特異性引物 NF 和 NR（表 2-1），并以中華蜜蜂總RNA 的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 cDNA 為模板，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) 1%的 TAE 瓊脂糖凝膠電泳檢驗(yàn)證，將含有目的條帶的凝膠回收，回收產(chǎn)物與連接載體 pEASY-T1 simple 進(jìn)行連接 20min 后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 DH5α 中。篩選出轉(zhuǎn)化結(jié)果為陽(yáng)性的菌液進(jìn)行測(cè)序，使用DNAMAN 軟件將測(cè)序結(jié)果與 NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)的中華蜜蜂 UBE2N 基因序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)兩序列一致，初步分離得到 AccUBE2N 基因的開(kāi)放閱讀框。序列特性分析表明，AccUBE2N 基因的開(kāi)放閱讀框?yàn)?456bp，編碼由 151 個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測(cè)該蛋白的分子量為 17.18kDa，預(yù)測(cè)等電點(diǎn)為 5.72（圖 3-1）。

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文為了進(jìn)一步了解中華蜜蜂 UBE2N 基因組的結(jié)構(gòu)特性，本實(shí)驗(yàn)對(duì)中華蜜蜂 UBE2N基因結(jié)構(gòu)組成進(jìn)行了分析，并與意大利蜜蜂（Apis mellifera）、埃及伊蚊（Aedes aegypti）、家蠅（Musca domestica）和麗蠅蛹集金小蜂（Nasonia vitripennis）的 UBE2N 基因組結(jié)構(gòu)組成進(jìn)行了比較（圖 3-2）。結(jié)果顯示，AccUBE2N 基因的全長(zhǎng)序列為 2579bp，由5'非翻譯區(qū)（5' untranslated regions，5' UTR）、3'非翻譯區(qū)（3' untranslated regions, 3'UTR）、2 個(gè)外顯子和 2 個(gè)內(nèi)含子組成（圖 3-1A）。比較不同昆蟲(chóng)的基因結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)盡管基因序列的總長(zhǎng)度具有較大差異，但都含有一個(gè)或兩個(gè)外顯子；不同昆蟲(chóng)外顯子的總長(zhǎng)度在進(jìn)化過(guò)程中呈現(xiàn)保守性，但位置大不相同。綜合考慮 UBE2N 基因全長(zhǎng)以及結(jié)構(gòu)組成的大小、位置，中華蜜蜂和意大利蜜蜂的 UBE2N 基因相結(jié)構(gòu)似度更高。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]氫醌引起TK6細(xì)胞毒性的差異蛋白組學(xué)研究[J]. 沙焱,楊震宇,周偉,謝英.  中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué). 2018(06)
[2]泛素結(jié)合酶E2 A在順鉑誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中的作用[J]. 王玉強(qiáng),李紅娟,蔣天靚,曹亦菲,楊軍.  癌變·畸變·突變. 2018(06)
[3]泛素-蛋白酶體途徑與砷致氧化應(yīng)激的研究進(jìn)展[J]. 呂瑩,胡勇.  醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐. 2018(02)
[4]中華蜜蜂酪胺受體基因克隆及表達(dá)分析[J]. 張麗珍,張永,胡景華,王子龍,曾志將.  遺傳. 2018(02)
[5]中華蜜蜂遺傳資源保護(hù)的方案與路徑[J]. 王紅芳,劉振國(guó),王穎,胥保華.  中國(guó)蜂業(yè). 2016(11)
[6]中華蜜蜂越冬管理現(xiàn)狀與對(duì)策[J]. 王天波.  中國(guó)蜂業(yè). 2016(02)
[7]氧化應(yīng)激與DNA損傷[J]. 冉茂良,高環(huán),尹杰,陳斌.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2013(10)
[8]中華蜜蜂在我國(guó)森林生態(tài)系統(tǒng)中的作用[J]. 楊冠煌.  中國(guó)蜂業(yè). 2009(04)
[9]去泛素化酶的研究及其進(jìn)展[J]. 王素霞,劉媛,吳慧娟,張志剛.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2008(06)
[10]淺議“西蜂”壓倒“中蜂”的危害性[J]. 李玉環(huán).  農(nóng)業(yè)科技與信息. 2008(12)



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