發(fā)布時間：2021-06-13 06:48

　　本文的研究對象為棉鈴蟲齒唇姬蜂Campoletis chlorideae Uchida,它是世界重大經(jīng)濟害蟲棉鈴蟲Helicoverpa armigera（Hubner）的優(yōu)勢種寄生蜂。本課題組從田間采樣發(fā)現(xiàn)了該蜂卵巢發(fā)育異常的現(xiàn)象,基于此,我們首先進行了轉(zhuǎn)錄組測序,篩選出卵黃原蛋白（Vitellogenin,Vg）及其受體（Vitellogenin receptor,VgR）2個生殖相關(guān)基因作為本研究的重點,研究其表達模式。并通過Bt（蘇云金芽孢桿菌,Bacillus thuringiensis）Cry 1Ac毒蛋白處理,探明Cry 1Ac毒蛋白對該蜂生長發(fā)育及對Vg和VgR基因轉(zhuǎn)錄表達水平的影響。進一步,圍繞雌蜂生殖異常,從解毒酶P450的2個基因進行了對比研究,希望通過昆蟲的解毒機制來探明棉鈴蟲齒唇姬蜂卵巢發(fā)育異常的原因。取得以下結(jié)果。一、棉鈴蟲齒唇姬蜂卵黃原蛋白Vg基因表達模式卵黃原蛋白（Vitellogenin,Vg）是昆蟲卵巢發(fā)育和卵子發(fā)生的關(guān)鍵蛋白。目前,有關(guān)寄生蜂卵黃原蛋白的研究明顯不足,而有關(guān)幼蟲內(nèi)寄生蜂是否存在卵黃原蛋白尚無定論。首先,基于棉鈴蟲齒唇姬蜂雌蜂轉(zhuǎn)錄組數(shù)... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學河南省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１?ＲＮＡ提取流程圖??

整的??Ｖｉｔｅｌｌｏｇｅｎｉｎ＿Ｎ?Ｓｕｐｐｅｒｆａｍｌｉｙ?ｄｏｍａｉｎ?（２２－７３９?ｂｐ），?—個?ＤＵＦ１９４３?結(jié)構(gòu)域（７７１－１０４７ｂｐ）和??一個?ＶＷＤ?結(jié)構(gòu)域（１４４６－１６２０ｂｐ）以及一個?Ｌｏｗ?ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ?ｒｅｇｉｏｎ?區(qū)域，如圖?３－３?所示，??此外，還包含?４?個?Ｎ－ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ?ｓｉｔｅｓ?（ＮＸＳ／Ｔ）?ａｎｄ?５?個?Ｋ／ＲＸＸＲ?ｃｌｅａｖａｇｅ?ｓｉｔｅｓ。??嫵離彳＿丨＿＿丨丨丨丨一．?丨．丨曬－垂．??圖３－３棉鈴蟲齒唇姬蜂Ｖｇ蛋白結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．?３－３．?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｄｏｍａｉｎ?ｏｆ?Ｖｇ?ｏｆ?Ｃａｍｐｏｌｅｔｉｓ?ｃｈｌｏｒｉｄｅａｅ??３．２．２．２棉鈴蟲齒唇姬蜂卵黃原蛋白基因及蛋白同源比對分析??對膜翅目２７種昆蟲（Ｇｅｎｅ?Ｋ）如表３－２所示）的Ｖｇ蛋白進行了系統(tǒng)發(fā)育樹分析，利用??ｍｅｇａＸ軟件，建立ＮＪ樹（Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值１０００），結(jié)果如圖３－４所示。??＼?１?Ｓ＇??＼?Ｉ?ｆ?ｉ５??卜?—．?（?Ｊｊ?Ｍ?＇?ＢｉｍｐａＶＧ??／?ｆ?ｉ?１?＼?°??Ｉ?＼?９??ｄ??圖３－４膜翅目２７種昆蟲Ｖｇ蛋白系統(tǒng)進化樹??Ｆｉｇ．?３－６?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｔｒｅｅ?ｏｆ?Ｖｇ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｏｆ?２７?Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ?ｓｐｅｃｉｅｓ??棉鈴蟲齒唇姬蜂與日本黑瘤姬蜂同屬于同一支，這與他們同屬姬蜂科匹配，同時，他們??與莖蜂科昆蟲ｏｒ／ｓａｗｗｓ和ＣＶ／７／２Ｍ?親緣關(guān)系最為接近，其次與小蜂總科昆蟲??Ｃｅｒａｔｏｓｏｌｅｎ?ｓｏｌｍｓｉ?ｍａｒｃｈａｌｉ，?Ｎａｓｏｎｉａ?ｖｉｔｒｉｐ

３．２．２田間棉鈴蟲齒唇姬蜂卵巢異常雌蜂Ｋｇ基因的表達??棉鈴蟲齒唇姬蜂田間卵黃原蛋白卵巢異常與正常樣本（均為７ｄ雌蜂樣本）實時熒光定??量表達量如圖３－６所示。轉(zhuǎn)錄組卵巢異常樣本卵黃原蛋白的表達量有較高的水平，正常雌蜂??樣本表達量較低，達到顯著差異（ｐ＜０．０１）。??０．２?－Ｉ?＊＊??〇?０．０８?－??＾?０．０４?■?纖爾！??ｎｏｒｍａｌ?ａｂｎｏｒｍａｌ??Ｔｅｓｔ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ??圖３－６田間正常雌蜂與卵巢異常雌蜂轉(zhuǎn)錄組樣本巧表達量??田間正常雌蜂轉(zhuǎn)錄組樣本：ｎｏｒｍａｌ；田間卵巢異常轉(zhuǎn)錄組樣本：ａｂｎｏｒｍａｌ。數(shù)據(jù)顯示為熒光定量表達量的平??均值示準差。＊＊表示表達量差異極顯著（ｐ＜〇．〇ｌ）??Ｆｉｇ．?３－６?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?Ｖｇ?ｉｎ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｏｆ?ｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ａｎｄ?ａｂｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｉｅｌｄ??Ｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｉｅｌｄ：?ｎｏｒｍａｌ；?Ａｂｎｏｒｍａｌ?ｏｖａｒｉａｎ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅ?ｉｎ?ｆｉｅｌｄ：??ａｂｎｏｒｍａｌ．?Ｔｈｅ?ｄａｔａ?ｗｅｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ａｓ?ｍｅａｎ?ｖａｌｕｅｓ?±ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｄｅｖｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．??Ｔｈｅ?＊＊＊＇?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｈｉｇｈｌｙ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖ

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本文編號：3227221