植物體內(nèi)具有化學(xué)、物理、生物等多種策略抵抗病原體的入侵,植物防御系統(tǒng)中最重要的一種策略是依賴于由抗性基因（Resistance gene,R）編碼的蛋白,其能夠特異性識別病原體。大豆花葉病毒（Soybean mosaic virus,SMV）在全球大豆生產(chǎn)中是最普遍的病毒。SMV是Potyviridae家族中Potyvirus屬的成員,其基因組是單鏈正義RNA,編碼10種蛋白質(zhì),分別是P1、HC-Pro、P3、6K1、CI、6K2、NIa-VPg、NIa-Pro、NIb、CP。對不同SMV株系具有抗性的多個獨(dú)立抗性基因座已被鑒定,其中大多數(shù)是非Toll白介素受體-核苷酸結(jié)合位點(diǎn)-亮氨酸重復(fù)（Non-TIR-NBS-LRR）類型的R基因。煙草中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了抗TMV的N基因,N基因?qū)儆贜BS-LRR類的R基因。我們實(shí)驗(yàn)室的前期研究在大豆基因組上發(fā)現(xiàn)一個與N基因同源的并對TMV和SMV都具有抗性的基因,將其命名為GmNH23（Glycine max NHomolog 23）。本研究的目的是確定GmNH23編碼對SMV具有抗性的功能結(jié)構(gòu)域,將GmNH23蛋白按照結(jié)構(gòu)域預(yù)測網(wǎng)站將其分成5個部分,分... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大豆花葉病毒的基因組組織

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士論文因分別簡稱為 p1、hc-pro、p3、6k1、ci、nia-vpg、nia-pro、nib、coat。本實(shí)驗(yàn)過表達(dá)載體為 pCAMBIA-Cluc，簡稱 pC-LUC。在載體上的多克隆位點(diǎn)內(nèi)選擇pn I 作為目的基因特異性引物的酶切位點(diǎn)，由于 hc-pro 目的基因內(nèi)存在這兩個所以 hc-pro 使用 EcoRⅠ和 XholⅠ兩種酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物。利用 Primer3 軟件式合成引物：c-pro 外的目的基因引物設(shè)計(jì)：Forward Primer 保護(hù)堿基+Sac I 酶切位點(diǎn)+分段基因上游引物Reverse Primer 保護(hù)堿基+ Kpn I 酶切位點(diǎn)+分段基因下游引物ro 引物設(shè)計(jì)：Forward Primer 保護(hù)堿基+EcoR I 酶切位點(diǎn)+分段基因上游引物Reverse Primer 保護(hù)堿基+Xhol I 酶切位點(diǎn)+分段基因下游引物

tive control; 5-6: pGEM-T-duf and negative control; 7-8: pGEM-T-tn and negative control; 9-10: pGEM and negative control（b）DigestionidentificationofrecombinantplasmidsM:DM2000DNAMaker（frombottomtotop:1250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、2000 bp）1: pGEM-T-tir; 2: pGEM-T-nb; 3: pGEM-T-duf; 4: pGEM; 5: pGEM-T-nd3.2 GmNH23 截段基因過表達(dá)載體的構(gòu)建為了在植物中表達(dá) GmNH23 截段基因，將 3.1 中測序鑒定正確的目的基因構(gòu)建到植元表達(dá)載體 pC-LUC 中，得到的重組質(zhì)粒進(jìn)行質(zhì)粒 PCR 和酶切鑒定（如圖 3.2.1）。顯示 GmNH23 的 5 個截段基因的植物雙元載體均構(gòu)建成功。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3226492