小型豬作為模式動(dòng)物由來(lái)已久,相比小鼠等模式生物,小型豬模型體重與人類相當(dāng),器官大小也與人類器官相似,而且在生理生化、解剖學(xué)和疾病發(fā)生機(jī)理等方面都與人類極為相似,許多基因在嚙齒類動(dòng)物模型中不具備與人體類似的生理代謝相關(guān)功能,而豬相比嚙齒類模型更貼近于人,通過(guò)在豬上研究相關(guān)基因的功能可以更好的驗(yàn)證其功能。這些優(yōu)勢(shì)都使小型豬模型動(dòng)物比之其他動(dòng)物模型不論生物或是醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中都具有極為重要的科研和應(yīng)用價(jià)值。在CRISPR/Cas系統(tǒng)出現(xiàn)之前,沒(méi)有合適的胚胎干細(xì)胞系一直是限制小型豬基因敲除的主要因素,CRISPR/Cas9技術(shù)的出現(xiàn)從技術(shù)上打破了這一僵局極大的方便了豬基因敲除模型的建立。PDX-1基因在胰腺發(fā)育中起著重要作用,早期胚胎發(fā)育時(shí)期,胰腺的發(fā)育主要是通過(guò)背腹兩側(cè)的上皮芽進(jìn)行融合從而形成胰芽。在小鼠中生產(chǎn)PDX-1基因敲除純合子小鼠后發(fā)現(xiàn),純合敲除的小鼠缺乏成熟的胰腺組織,并且十二指腸的部分區(qū)域也呈現(xiàn)異常狀態(tài)。出生后的小鼠不能存活很久,會(huì)很快死于高血糖。巴馬香豬上PDX-1基因在豬并沒(méi)有做過(guò)敲除研究,尚不清楚其在豬上的功能。本論文主要研究在小型豬上如何通過(guò)超數(shù)排卵獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)胚胎用于胞漿... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 CRISPR/CAS系統(tǒng)
        1.1.1 CRISPR研究簡(jiǎn)史
        1.1.2 CRISPR/CAS系統(tǒng)的機(jī)制
        1.1.3 基因編輯技術(shù)在轉(zhuǎn)基因豬中的應(yīng)用及存在問(wèn)題
    1.2 超數(shù)排卵
        1.2.1 哺乳動(dòng)物卵泡形成的特點(diǎn)
        1.2.2 超排研究的目的和意義
        1.2.3 超排原理
        1.2.4 影響哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)生的激素
        1.2.5 影響超排效果的因素
        1.2.6 超數(shù)排卵研究進(jìn)展
    1.3 PDX-1 基因的概述
        1.3.1 PDX-1 基因的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 PDX-1 基因的表達(dá)
        1.3.3 PDX-1 基因在胰腺發(fā)育中的作用
        1.3.4 PDX-1 基因缺陷豬的應(yīng)用價(jià)值
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和CRISPR/Cas9系統(tǒng)
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.1.3 試驗(yàn)中常用試劑及配制
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備
        2.2.2 超排處理
        2.2.3 胚胎回收
        2.2.4 目的基因的靶向sg RNA的設(shè)計(jì)
        2.2.5 體外合成Cas9 mRNA和sgRNA
        2.2.6 胞質(zhì)注射
        2.2.7 胚胎移植
        2.2.8 受體移植懷孕判斷
        2.2.9 卵母細(xì)胞的獲取
        2.2.10 卵母細(xì)胞體外成熟
        2.2.11 I VF體外受精
        2.2.12 孤雌胚胎獲得
        2.2.13 PDX-1 基因敲除豬只的鑒定
        2.2.14 統(tǒng)計(jì)分析方法
3 結(jié)果
    3.1 超排劑量和排卵點(diǎn)數(shù)量的關(guān)系
    3.2 超排劑量和囊腫的數(shù)量的關(guān)系
    3.3 超排劑量和白體的數(shù)量的關(guān)系
    3.4 不同季節(jié)下對(duì)超排卵數(shù)的影響
    3.5 超排胚胎和體外獲得的孤雌、I VF、S CNT胚胎發(fā)育的差異
    3.6 胞漿注射獲得的PDX-1 缺陷豬模型的鑒定
4 討論
    4.1 超數(shù)排卵
        4.1.1 超排激素類型對(duì)超排結(jié)果的影響
        4.1.2 超排劑量對(duì)超排結(jié)果的影響
        4.1.3 前列烯醇在超排中的作用
        4.1.4 季節(jié)因素對(duì)超排的影響
    4.2 PDX-1 基因敲除豬
        4.2.1 目的基因的選擇和基因敲除動(dòng)物的制備方法
        4.2.2 基因敲除動(dòng)物的鑒定與檢測(cè)
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3219857