結(jié)核分枝桿菌具有獨(dú)特的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),與病原菌致病性息息相關(guān)。其中,最具代表性的成分是結(jié)核菌醇蠟分支酸酯（PDIM）,它位于細(xì)菌細(xì)胞壁的表面,對維持細(xì)胞壁的完整性十分重要。同時(shí),PDIM也是結(jié)核分枝桿菌重要的毒力因子之一,它的生物合成和轉(zhuǎn)運(yùn)對細(xì)菌感染宿主以及感染后在宿主胞內(nèi)的存活發(fā)揮了不可或缺的重要作用。但是,目前我們對于PDIM代謝基因的表達(dá)調(diào)控了解得非常少,直接相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子尚未鑒定。本研究利用M.bovis BCG為模式菌株,首次發(fā)現(xiàn)和鑒定了轉(zhuǎn)錄因子HpoR可以直接調(diào)控PDIM合成基因簇的表達(dá),具體結(jié)果如下:（1）利用凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)（EMSA）以及染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)（ChIP）證明了HpoR在M.bovis BCG細(xì)菌體內(nèi)以及體外均能與PDIM操縱子的啟動(dòng)子bcg₂950p結(jié)合,而且這種結(jié)合具有明顯的序列特異性;（2）通過設(shè)計(jì)、制備涵蓋不同長度的bcg₂950p DNA片段,EMSA實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HpoR特異性結(jié)合在bcg₂950p的P1區(qū)段,進(jìn)一步測序分析發(fā)現(xiàn)其中含有一個(gè)保守的反向回文結(jié)構(gòu);（3）β-半乳糖苷酶活性實(shí)驗(yàn)及... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 分枝桿菌與分枝桿菌細(xì)胞壁
        1.1.1 分枝桿菌與結(jié)核病
        1.1.2 分枝桿菌細(xì)胞壁
    1.2 分枝桿菌的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        1.2.1 轉(zhuǎn)錄因子家族概述
        1.2.2 TetR家族轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.3 分枝桿菌的脂質(zhì)調(diào)控
        1.2.4 轉(zhuǎn)錄因子HpoR
    1.3 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 供試菌株與細(xì)胞
        2.1.2 供試質(zhì)粒
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所用引物
        2.1.5 抗生素和酶
        2.1.6 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑
        2.1.7 其他主要試劑配方
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 基因克隆
        2.2.2 蛋白質(zhì)表達(dá)純化、透析及檢測
        2.2.3 細(xì)菌總蛋白的提取與純化
        2.2.4 轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性分析
        2.2.5 靶基因鑒定和分析
        2.2.6 細(xì)胞表型的研究
3 結(jié)果與分析
    3.1 HpoR靶基因的鑒定
        3.1.1 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)HpoR參與調(diào)控脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)
        3.1.2 定量蛋白質(zhì)組學(xué)證實(shí)HpoR調(diào)控PDIM代謝相關(guān)酶的表達(dá)
        3.1.3 組學(xué)聯(lián)合分析發(fā)現(xiàn)HpoR調(diào)控PDIM基因簇
    3.2 HpoR基因克隆和蛋白質(zhì)純化
    3.3 HpoR特異性結(jié)合bcg_2950p調(diào)控PDIM操縱子表達(dá)
        3.3.1 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)(EMSA)證明HpoR特異性結(jié)合啟動(dòng)子bcg_2950p
        3.3.2 染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證明HpoR在體內(nèi)能結(jié)合bcg_2950p
    3.4 HpoR作為阻遏子負(fù)調(diào)控靶基因的表達(dá)
        3.4.1 β-半乳糖苷酶活實(shí)驗(yàn)證實(shí)Hpo R是一個(gè)抑制子
        3.4.2 q RT-PCR實(shí)驗(yàn)證實(shí)Hpo R負(fù)調(diào)控下游靶基因的表達(dá)
    3.5 HpoR抑制細(xì)菌的胞內(nèi)生存能力
    3.6 HpoR抑制炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生
    3.7 HpoR促進(jìn)細(xì)胞凋亡和活性氧的產(chǎn)生
        3.7.1 HpoR可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡
        3.7.2 HpoR可以促進(jìn)活性氧(ROS)的產(chǎn)生
4 總結(jié)與討論
    4.1 總結(jié)
    4.2 討論
        4.2.1 細(xì)菌細(xì)胞壁與宿主免疫反應(yīng)
        4.2.2 HpoR的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及免疫調(diào)節(jié)功能
    4.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3207838