APETALA2（AP2）家族作為 APETALA2/ethylene-responsive element binding protein（AP2/EREBP）轉錄因子家族的亞族之一,廣泛參與植株的生長發(fā)育、脅迫應答和多種生理生化反應。AP2基因作為該家族中的一員,在不同植物的多種組織中都有表達。啟動子從轉錄水平上調控基因表達,基因特異性啟動子通過順式作用元件直接調控下游基因的表達時間、表達部位以及表達強度。本試驗從白樺（Betula platyphylla Suk.）中克隆了AP2基因及其系列啟動子片段,具體結果如下:（1）白樺AP2基因啟動子的克隆及其轉錄活性分析。從白樺基因組中擴增長為2308bp的啟動子序列proBpAP2及6個AP2基因5’端缺失的啟動子片段Pn（n=1,2,……,5,6）。采用雙酶切法將proBpAP2及6個5’端缺失片段分別克隆至pBI121植物表達載體中,構建含特異啟動子的表達載體proBpAP2::GUS及Pn::GUS（n=1,2,……,5,6）。用農(nóng)桿菌介導法浸染白樺和擬南芥,進行GUS組織化學染色分析,結果表明proBpAP2及6個缺失片段啟動... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 白樺的研究進展
    1.2 AP2基因及其轉錄因子家族的研究進展
    1.3 啟動子的研究進展
        1.3.1 結構及分類
        1.3.2 克隆及分析方法
    1.4 研究的目的意義
2 BpAP2基因啟動子及其缺失片段的克隆與表達分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 白樺組培苗DNA的提取
        2.2.2 BpAP2基因啟動子及其系列缺失片段的擴增
        2.2.3 TA克隆
        2.2.4 目的基因與表達載體的連接
        2.2.5 重組質粒轉化感受態(tài)
        2.2.6 啟動子功能元件分析
        2.2.7 農(nóng)桿菌滲透法轉化白樺及擬南芥
        2.2.8 GUS組織化學染色分析
        2.2.9 激素處理轉化后的擬南芥
        2.2.10 qRT-PCR表達模式分析
    2.3 結果與分析
        2.3.1 BpAP2基因啟動子及其系列缺失片段表達載體的構建
        2.3.2 白樺BpAP2基因系列啟動子序列分析及順式元件預測
        2.3.3 proBpAP2及其系列缺失片段的轉錄活性分析
        2.3.4 激素對白樺BpAP2啟動子活性的影響
    2.4 討論
3 BpAP2基因過表達載體的構建與遺傳轉化
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株與載體
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 CTAB法提取白樺RNA
        3.2.2 反轉錄成cDNA
        3.2.3 BpAP2基因編碼區(qū)的擴增
        3.2.4 TA克隆
        3.2.5 目的基因與表達載體的連接
        3.2.6 BpAP2轉基因植物的獲得
        3.2.7 形態(tài)學觀察及數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3.2.8 qRT-PCR表達模式分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 BpAP2基因植物過表達載體的構建
        3.3.2 BpAP2過表達載體轉化擬南芥
        3.3.3 BpAP2轉基因擬南芥的形態(tài)觀察及數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3.3.4 BpAP2基因對擬南芥根毛和毛狀體生長的影響
    3.4 討論
結論
參考文獻
附錄
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]轉cAPX基因楊樹的獲得及cAPX基因啟動子序列的克隆與分析[D]. 姚葉.山東師范大學 2013
[3]大豆PKS4基因及其啟動子的克隆、表達載體構建及植物轉化[D]. 李俊英.吉林農(nóng)業(yè)大學 2012
[4]橡膠樹SUT基因HbSUT3與HbSUT5啟動子的克隆與功能分析[D]. 辛魯生.海南大學 2012
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[6]枳CBF1類似基因（PtCBF1）啟動子功能分析[D]. 祝梅.華中農(nóng)業(yè)大學 2009



本文編號：3205874