APETALA2（AP2）家族作為 APETALA2/ethylene-responsive element binding protein（AP2/EREBP）轉(zhuǎn)錄因子家族的亞族之一,廣泛參與植株的生長發(fā)育、脅迫應(yīng)答和多種生理生化反應(yīng)。AP2基因作為該家族中的一員,在不同植物的多種組織中都有表達(dá)。啟動子從轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控基因表達(dá),基因特異性啟動子通過順式作用元件直接調(diào)控下游基因的表達(dá)時間、表達(dá)部位以及表達(dá)強(qiáng)度。本試驗(yàn)從白樺（Betula platyphylla Suk.）中克隆了AP2基因及其系列啟動子片段,具體結(jié)果如下:（1）白樺AP2基因啟動子的克隆及其轉(zhuǎn)錄活性分析。從白樺基因組中擴(kuò)增長為2308bp的啟動子序列proBpAP2及6個AP2基因5’端缺失的啟動子片段Pn（n=1,2,……,5,6）。采用雙酶切法將proBpAP2及6個5’端缺失片段分別克隆至pBI121植物表達(dá)載體中,構(gòu)建含特異啟動子的表達(dá)載體proBpAP2::GUS及Pn::GUS（n=1,2,……,5,6）。用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法浸染白樺和擬南芥,進(jìn)行GUS組織化學(xué)染色分析,結(jié)果表明proBpAP2及6個缺失片段啟動... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 白樺的研究進(jìn)展
    1.2 AP2基因及其轉(zhuǎn)錄因子家族的研究進(jìn)展
    1.3 啟動子的研究進(jìn)展
        1.3.1 結(jié)構(gòu)及分類
        1.3.2 克隆及分析方法
    1.4 研究的目的意義
2 BpAP2基因啟動子及其缺失片段的克隆與表達(dá)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 白樺組培苗DNA的提取
        2.2.2 BpAP2基因啟動子及其系列缺失片段的擴(kuò)增
        2.2.3 TA克隆
        2.2.4 目的基因與表達(dá)載體的連接
        2.2.5 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)
        2.2.6 啟動子功能元件分析
        2.2.7 農(nóng)桿菌滲透法轉(zhuǎn)化白樺及擬南芥
        2.2.8 GUS組織化學(xué)染色分析
        2.2.9 激素處理轉(zhuǎn)化后的擬南芥
        2.2.10 qRT-PCR表達(dá)模式分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 BpAP2基因啟動子及其系列缺失片段表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.2 白樺BpAP2基因系列啟動子序列分析及順式元件預(yù)測
        2.3.3 proBpAP2及其系列缺失片段的轉(zhuǎn)錄活性分析
        2.3.4 激素對白樺BpAP2啟動子活性的影響
    2.4 討論
3 BpAP2基因過表達(dá)載體的構(gòu)建與遺傳轉(zhuǎn)化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株與載體
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 CTAB法提取白樺RNA
        3.2.2 反轉(zhuǎn)錄成cDNA
        3.2.3 BpAP2基因編碼區(qū)的擴(kuò)增
        3.2.4 TA克隆
        3.2.5 目的基因與表達(dá)載體的連接
        3.2.6 BpAP2轉(zhuǎn)基因植物的獲得
        3.2.7 形態(tài)學(xué)觀察及數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3.2.8 qRT-PCR表達(dá)模式分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 BpAP2基因植物過表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 BpAP2過表達(dá)載體轉(zhuǎn)化擬南芥
        3.3.3 BpAP2轉(zhuǎn)基因擬南芥的形態(tài)觀察及數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3.3.4 BpAP2基因?qū)M南芥根毛和毛狀體生長的影響
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]轉(zhuǎn)cAPX基因楊樹的獲得及cAPX基因啟動子序列的克隆與分析[D]. 姚葉.山東師范大學(xué) 2013
[3]大豆PKS4基因及其啟動子的克隆、表達(dá)載體構(gòu)建及植物轉(zhuǎn)化[D]. 李俊英.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]橡膠樹SUT基因HbSUT3與HbSUT5啟動子的克隆與功能分析[D]. 辛魯生.海南大學(xué) 2012
[5]玉米PAB5基因啟動子的克隆與功能分析[D]. 鄭麗莉.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[6]枳CBF1類似基因（PtCBF1）啟動子功能分析[D]. 祝梅.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3205874