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朱砂葉螨超氧化物歧化酶基因的克隆與表達(dá)分析

發(fā)布時(shí)間:2021-05-24 06:30
  朱砂葉螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)隸屬于蛛形綱、蜱螨亞綱、葉螨科,是一種世界性的農(nóng)業(yè)害螨,會(huì)危害豆類、棉花、蔬菜和果樹等經(jīng)濟(jì)作物以及觀賞植物。長(zhǎng)期以來(lái),對(duì)朱砂葉螨的防治主要以化學(xué)藥劑為主,在應(yīng)對(duì)環(huán)境脅迫時(shí),機(jī)體內(nèi)抗氧化酶在生理生化方面會(huì)發(fā)生一系列變化,而對(duì)于抗氧化酶基因在分子水平上的變化尚不清楚。本文以朱砂葉螨為研究對(duì)象,運(yùn)用RT-PCR結(jié)合RACE技術(shù)克隆得到了朱砂葉螨3個(gè)超氧化物歧化酶SOD基因cDNA的全長(zhǎng),并進(jìn)行了序列分析,并且通過qRT-PCR技術(shù)研究SOD基因在逆境脅迫下的mRNA表達(dá)水平,主要研究結(jié)果如下:一、朱砂葉螨超氧化物歧化酶基因序列的特征分析克隆得到了朱砂葉螨細(xì)胞質(zhì)Cu/ZnSOD、細(xì)胞外Cu/ZnSOD和線粒體MnSOD的cDNA全長(zhǎng),分別命名為TcSOD1,TcSOD2和TcSOD3。TcSOD1基因GenBank登錄號(hào)為KY348746,全長(zhǎng)827 bp,其中開放閱讀框(ORF)長(zhǎng)為459 bp,編碼152 aa,分子質(zhì)量約為15.559 kDa,理論等電點(diǎn)pI為6.02,其氨基酸序列包含2個(gè)簽名基序,分別是43-... 

【文章來(lái)源】:南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】:66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 朱砂葉螨的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 朱砂葉螨生物學(xué)特征
        1.1.2 朱砂葉螨的抗性研究
        1.1.3 朱砂葉螨的防治
    1.2 超氧化物歧化酶基因的研究進(jìn)展
        1.2.1 超氧化物歧化酶概述
        1.2.2 SOD的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和三維結(jié)構(gòu)
        1.2.3 SOD基因研究進(jìn)展
    1.3 本研究的意義及主要內(nèi)容
        1.3.1 本研究的意義
        1.3.2 本研究的主要內(nèi)容
第2章 朱砂葉螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試螨源
        2.1.2 主要儀器和試劑
        2.1.3 朱砂葉螨總RNA的提取
        2.1.4 cDNA第一鏈的合成
        2.1.5 朱砂葉螨5’和3’RACE cDNA的準(zhǔn)備
        2.1.6 朱砂葉螨SOD基因全長(zhǎng)的克隆
        2.1.7 三種SOD基因全長(zhǎng)的獲得及生物信息學(xué)分析
        2.1.8 朱砂葉螨SOD基因的同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 朱砂葉螨Tc SOD基因全長(zhǎng)的克隆
        2.2.2 朱砂葉螨Tc SOD基因全長(zhǎng)的生物信息學(xué)分析
        2.2.3 Tc SOD的同源性與系統(tǒng)發(fā)育分析
    2.3 討論
第3章 朱砂葉螨Tc SOD在環(huán)境脅迫下的mRNA表達(dá)特性
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試螨源
        3.1.2 主要儀器和試劑
        3.1.3 朱砂葉螨樣品的收集
        3.1.4 不同溫度處理雌成螨
        3.1.5 不同殺螨劑處理雌成螨
        3.1.6 總RNA提取
        3.1.7 cDNA第一鏈的合成
        3.1.8 RT-qPCR引物設(shè)計(jì)
        3.1.9 RT-qPCR檢測(cè)不同逆境脅迫下SOD表達(dá)水平
        3.1.10 熒光定量數(shù)據(jù)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 熒光定量PCR溶解曲線
        3.2.2 溫度脅迫下Tc SOD的表達(dá)研究
        3.2.3 不同殺螨劑脅迫下Tc SOD的表達(dá)研究
    3.3 討論
第4章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]朱砂葉螨的識(shí)別與防治[J]. 王澤華,宮亞軍,魏書軍,康總江,朱亮,金桂華,石寶才.  中國(guó)蔬菜. 2013(05)
[2]中華蜜蜂銅鋅超氧化物歧化酶基因的克隆、序列分析及表達(dá)特征[J]. 劉俊峰,劉亭亭,王歡,王子龍,顏偉玉,曾志將,吳小波.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2012(08)
[3]柞蠶銅鋅超氧化物歧化酶基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 姚立虎,朱保建,劉朝良,魏國(guó)清,吳祥,曹甲,錢岑,湯良文,周炎.  蠶業(yè)科學(xué). 2009(03)
[4]我國(guó)朱砂葉螨研究進(jìn)展[J]. 劉波,桂連友.  長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)農(nóng)學(xué)卷. 2007(03)
[5]超氧化物歧化酶研究和應(yīng)用進(jìn)展[J]. 李敬璽,劉繼蘭,王選年,銀梅,葛亞明,唐海蓉.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2007(07)
[6]野桑蠶銅鋅超氧化物歧化酶基因的克隆分析與原核表達(dá)[J]. 叢海峰,徐世清,司馬楊虎,張升祥,王更先,董航,劉瑩,柳學(xué)廣.  蠶業(yè)科學(xué). 2007(02)
[7]粘蟲膠防治冬棗紅蜘蛛的效果[J]. 巴秀成,王小夢(mèng),常會(huì)紅,周霞.  中國(guó)南方果樹. 2007(02)
[8]用自助法統(tǒng)計(jì)推斷炔螨特對(duì)桑樹朱砂葉螨的防治效果[J]. 吳福安,余茂德,王興科,程嘉翎.  蠶業(yè)科學(xué). 2006(04)
[9]利用SPSS軟件計(jì)算殺蟲劑的LC50[J]. 賈春生.  昆蟲知識(shí). 2006(03)
[10]不同寄主植物對(duì)二斑葉螨和朱砂葉螨發(fā)育歷期和產(chǎn)卵量的影響[J]. 馬俐,賈煒,洪曉月,王冬生.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2005(04)

博士論文
[1]朱砂葉螨對(duì)苯甲;孱悮⑾x劑脅迫的響應(yīng)及機(jī)制研究[D]. 辛天蓉.南昌大學(xué) 2015

碩士論文
[1]柑桔全爪螨超氧化物歧化酶基因克隆與功能初探[D]. 馮英財(cái).西南大學(xué) 2016
[2]煙粉虱超氧化物歧化酶功能基因研究[D]. 高現(xiàn)龍.浙江大學(xué) 2013
[3]朱砂葉螨酯酶同工酶研究及酯酶cDNA克隆與序列分析[D]. 曹小芳.西南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào):3203721

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