目的:探討尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1Al（uridine diphosphate glucuronyltransferase 1A1,UGT1A1）基因野生型和Q239X突變型在非洲綠猴腎細(xì)胞（cos-7細(xì)胞）中的表達(dá)及功能。方法:構(gòu)建UGT1A1基因野生型過表達(dá)、UGT1A1基因Q239X突變型過表達(dá)慢病毒載體和陰性慢病毒載體,分別對體外培養(yǎng)的cos-7細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染72h后,熒光倒置相差顯微鏡及流式細(xì)胞儀觀察和檢測cos-7細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,用l.Omg/L嘌呤霉素篩選1周得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,采用DNA測序鑒定所構(gòu)建的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染UGT1A1基因的cos-7細(xì)胞株。將cos-7細(xì)胞分為5組:空白對照組,陰性慢病毒組,UGT1A1基因野生型組,UGT1A1基因Q239X雜合突變型組,UGT1A1基因Q239X純合突變型組。PCR、Real-Time PCR和 Western Blot檢測各組cos-7細(xì)胞中UGT1A1 基因的DNA、mRNA和蛋白表達(dá)情況;繪制非結(jié)合膽紅素的標(biāo)準(zhǔn)曲線,設(shè)計兩組反應(yīng),野生型為對照組,Q239X雜合突變型為實驗組,催化非結(jié)合膽紅素與尿苷二磷酸葡萄糖醛酸（... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
個人簡歷
中文摘要
英文摘要
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 UGT1A1基因野生型和Q239X突變型過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的建立
    1. 材料和方法
    2. 實驗結(jié)果
    3. 討論
    4. 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 UGT1A1基因野生型和Q239X突變型在cos-7細(xì)胞中的表達(dá)及功能研究
    1. 材料和方法
    2. 實驗結(jié)果
    3. 討論
    4. 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
綜述 UGT1A1基因多態(tài)性與疾病相關(guān)性的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
英文縮略詞表
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3203543