轉(zhuǎn)錄因子以反式作用因子的形式與基因啟動子序列中的順式作用元件特異性結(jié)合,通過與其他相關(guān)蛋白之間的互作來激活或者抑制轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)控下游靶基因的表達。ERF家族基因是一類植物中特有的與植物生長發(fā)育和生物、非生物脅迫應(yīng)答相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子基因。通過RNA-Seq方法篩選楊樹中應(yīng)答鹽脅迫的ERF基因,結(jié)果顯示在所有上調(diào)表達的ERF家族基因中,轉(zhuǎn)錄因子ERF76基因的相對表達量變化最顯著。利用RT-qPCR對ERF76基因在3個不同組織和5個不同鹽脅迫時間點的時空表達模式進行分析,結(jié)果顯示ERF76基因在根莖葉中均有表達,在根中相對表達水平最高,依次是葉和莖,在脅迫3-36 h時間段內(nèi),該基因在根莖葉中相對表達水平達到峰值的時間點均在12 h。利用巢式PCR從小黑楊基因組中克隆出ERF76基因上游1.5 kb的DNA序列。元件預(yù)測顯示,ERF76基因啟動子序列中包含轉(zhuǎn)錄、植物脅迫應(yīng)答和植物生長發(fā)育相關(guān)的順式作用元件。利用酵母單雜交鑒定與ERF76基因啟動子互作的蛋白包括轉(zhuǎn)錄、氧化還原酶活性、植物防御和應(yīng)激反應(yīng)、植物生長發(fā)育相關(guān)蛋白。利用RT-qPCR.GUS染色和GUS熒光定量檢測轉(zhuǎn)基因擬南芥中不同... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 前言
    1.2 植物應(yīng)答鹽脅迫機制
        1.2.1 植物應(yīng)答鹽脅迫的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
        1.2.2 植物鹽脅迫應(yīng)激反應(yīng)
    1.3 植物基因啟動子
        1.3.1 植物基因啟動子的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 植物基因啟動子的分類
        1.3.3 植物基因啟動子鑒定
        1.3.4 植物基因5’端非翻譯區(qū)
    1.4 植物轉(zhuǎn)錄因子
        1.4.1 植物轉(zhuǎn)錄因子的功能和結(jié)構(gòu)
        1.4.2 植物AP2/ERF家族轉(zhuǎn)錄因子
        1.4.3 植物ERF轉(zhuǎn)錄因子
    1.5 RNA測序的研究進展
    1.6 本文主要研究內(nèi)容與目的
    1.7 本文技術(shù)路線
2 楊樹應(yīng)答鹽脅迫ERF轉(zhuǎn)錄因子家族基因分析
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 DEGs聚類分析
        2.2.2 DEGs的GO富集分析
        2.2.3 DEGs的Pathway分析
        2.2.4 AP2/ERF家族基因表達變化分析
        2.2.5 楊樹ERF76基因鹽脅迫條件下時空表達模式分析
    2.3 本章小結(jié)
3 小黑楊ERF76基因啟動子的克隆與功能分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 相關(guān)引物設(shè)計
        3.1.3 ERF76基因啟動子序列克隆
        3.1.4 ERF76基因啟動子載體構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.1.5 ERF76基因啟動子序列分析
        3.1.6 ERF76基因啟動子功能驗證
        3.1.7 酵母單雜交
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 ERF76基因啟動子片段載體構(gòu)建
        3.2.2 ERF76基因啟動子序列分析
        3.2.3 ERF76基因啟動子功能驗證
        3.2.4 酵母單雜交結(jié)果分析
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
4 楊樹轉(zhuǎn)錄因子ERF76基因?qū)傩苑治?br>    4.1 實驗材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 ERF76基因克隆
        4.1.3 ERF76序列分析
        4.1.4 ERF76基因載體構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        4.1.5 ERF76亞細胞定位分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 楊樹ERF76基因克隆
        4.2.2 ERF76基因的植物表達載體構(gòu)建
        4.2.3 ERF76序列分析
        4.2.4 ERF76亞細胞定位分析
    4.3 本章小結(jié)
5 ERF76基因過表達轉(zhuǎn)基因煙草耐鹽脅迫分析
    5.1 實驗材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 常用培養(yǎng)基
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 主要溶液配制
    5.2 試驗方法
        5.2.1 轉(zhuǎn)ERF76基因煙草的培育
        5.2.2 轉(zhuǎn)基因煙草耐鹽分析及形態(tài)指標(biāo)的測定
        5.2.3 轉(zhuǎn)基因株系生理指標(biāo)的測定及生化指標(biāo)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 轉(zhuǎn)基因煙草鑒定
        5.3.2 轉(zhuǎn)基因煙草耐鹽能力分析
        5.3.3 轉(zhuǎn)基因煙草形態(tài)指標(biāo)測定
        5.3.4 轉(zhuǎn)基因煙草生理和生化指標(biāo)測定
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
6 ERF76基因過表達轉(zhuǎn)基因楊樹耐鹽脅迫分析
    6.1 實驗材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 常用培養(yǎng)基
        6.1.3 主要試劑及溶液配制
    6.2 試驗方法
        6.2.1 轉(zhuǎn)ERF76基因楊樹的培育
        6.2.2 轉(zhuǎn)基因楊樹耐鹽測試及形態(tài)指標(biāo)的測定
        6.2.3 轉(zhuǎn)基因楊樹ABA和GA相對含量的測定
        6.2.4 轉(zhuǎn)基因楊樹生理指標(biāo)的測定
        6.2.5 實時熒光定量PCR檢測
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 轉(zhuǎn)基因楊樹的鑒定
        6.3.2 轉(zhuǎn)基因楊樹耐鹽能力檢測
        6.3.3 轉(zhuǎn)基因楊樹形態(tài)指標(biāo)測定
        6.3.4 轉(zhuǎn)基因楊樹ABA和GA相對含量測定
        6.3.5 轉(zhuǎn)基因楊樹生理指標(biāo)測定
        6.3.6 RT-PCR檢測
    6.4 討論
    6.5 本章小結(jié)
7 轉(zhuǎn)基因楊樹RNA測序分析
    7.1 實驗材料與方法
        7.1.1 實驗材料
        7.1.2 RNA測序數(shù)據(jù)處理與分析方法
        7.1.3 RT-qPCR檢測
    7.2 結(jié)果與分析
        7.2.1 不同樣本間DEGs分析
        7.2.2 DEGs功能分析
        7.2.3 RT-qPCR
    7.3 討論
    7.4 本章小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
附件


【參考文獻】：
期刊論文
[1]擬南芥漆酶基因AtLAC4參與生長及非生物脅迫響應(yīng)[J]. 張盛春,鞠常亮,王小菁.  植物學(xué)報. 2012(04)



本文編號：3199245