心肌肌鈣蛋白T（cardiac troponin T,cTnT）作為心肌纖維細(xì)肌絲的結(jié)構(gòu)蛋白,參與心臟興奮收縮耦聯(lián)過(guò)程。tnnt2a為斑馬魚(yú)cTnT基因的亞型。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)成功構(gòu)建了可穩(wěn)定遺傳tnnt2a缺失突變斑馬魚(yú)。對(duì)tnnt2a缺失突變體進(jìn)行表型分析,結(jié)果顯示tnnt2a+/-斑馬魚(yú)心臟無(wú)明顯異常,而tnnt2a-/-斑馬魚(yú)心臟在胚胎發(fā)育早期具有顯著的突變表型,表現(xiàn)為心臟無(wú)搏動(dòng)、心房和心室增大、心包積液,并于受精后6⁷天死亡。運(yùn)用real time RT-PCR檢測(cè)tnnt2a、actc1a、tpm4a、myl7和vmhc基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況,結(jié)果顯示tnnt2a^-/^-（Δ2）斑馬魚(yú)tnnt2a基因在發(fā)育的各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)水平均顯著下降;而actc1a、tpm4a、myl7和vmhc基因在突變體胚胎發(fā)育早期表達(dá)增高,晚期則表達(dá)下降。進(jìn)一步對(duì)心臟組織進(jìn)行電鏡觀察和免疫熒光染色,結(jié)果顯示tnnt2a^-/^-（Δ2）斑馬魚(yú)心臟無(wú)正常粗、細(xì)肌絲結(jié)構(gòu),同時(shí)F-... 

【文章來(lái)源】：生理學(xué)報(bào). 2017,69(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 抗體及熒光染料
    1.3 靶位點(diǎn)選擇和突變體鑒定引物設(shè)計(jì)
    1.4 獲得F0突變嵌合體 (mosaic) 斑馬魚(yú)
    1.5 獲得tnnt2a基因純合突變 (tnnt2a-/-) 斑馬魚(yú)
    1.6 tnnt2a-/-斑馬魚(yú)表型分析及心率記錄
    1.7 Real time RT-PCR檢測(cè)基因表達(dá)情況
    1.8 tnnt2a-/-斑馬魚(yú)心臟細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)分析
    1.9 tnnt2a-/-斑馬魚(yú)免疫熒光染色
    1.1 0 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 F0突變嵌合體斑馬魚(yú)測(cè)序結(jié)果
    2.2 獲得tnnt2a基因純合突變斑馬魚(yú)
    2.3 tnnt2a基因突變斑馬魚(yú)表型分析和心率
    2.4 tnnt2a-/- (Δ2) 斑馬魚(yú)心肌肌節(jié)基因表達(dá)水平
    2.5 tnnt2a-/- (Δ2) 斑馬魚(yú)心臟組織電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察和免疫熒光染色
3 討論



本文編號(hào)：3197030