無(wú)籽蜜柚（Citrus ’seedless’）現(xiàn)廣泛種植于中國(guó)海南省,該品種的基本特征是成熟期表皮薄,果皮綠,無(wú)籽。本研究以無(wú)籽蜜柚汁胞為試材,對(duì)其物理指標(biāo)和內(nèi)含物進(jìn)行了檢測(cè)分析,發(fā)現(xiàn)在120～210DAF,由于儲(chǔ)存物的累積導(dǎo)致果實(shí)重量增長(zhǎng)率顯著高于體積增長(zhǎng)率。通過(guò)HPLC可溶性糖成分分析表明,阿拉伯糖在汁胞的早期發(fā)育中含量較高,而果糖、葡萄糖和蔗糖在汁胞成熟過(guò)程中含量顯著增加。為深入挖掘糖組分轉(zhuǎn)化的相關(guān)基因,結(jié)合糖組分轉(zhuǎn)化模式,選取4個(gè)關(guān)鍵時(shí)期（60、120、180和240 DAF）的無(wú)籽蜜柚汁胞進(jìn)行比較轉(zhuǎn)錄組分析,共得到38,981個(gè)unigenes,其中8,275個(gè)unigenes在發(fā)育過(guò)程中呈現(xiàn)差異表達(dá)。基于無(wú)籽蜜柚轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),確定5個(gè)基因（UBC、ACT、OR23、DWA2、CYP21D）可作為無(wú)籽蜜柚汁胞qRT-PCR分析的內(nèi)參基因。蔗糖是光合作用的最終產(chǎn)物,通過(guò)韌皮部運(yùn)輸?shù)街参锏姆枪夂辖M織中,蔗糖的分解主要由蔗糖合酶（SUS）和蔗糖轉(zhuǎn)化酶（INV）催化。為了探究SUS和INV基因家族在無(wú)籽蜜柚汁胞發(fā)育中的功能,本研究以無(wú)籽蜜柚為試材,基于擬南芥數(shù)據(jù)庫(kù)中SUS和INV蛋白序... 

【文章來(lái)源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 導(dǎo)論
    1.1 柚子概述
    1.2 果實(shí)發(fā)育國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 果實(shí)生理功能研究現(xiàn)狀
        1.2.2 蔗糖合成:SPS和SPP
        1.2.3 糖的積累代謝過(guò)程
        1.2.4 蔗糖代謝關(guān)鍵基因研究進(jìn)展
        1.2.5 不同糖對(duì)糖代謝相關(guān)酶的影響研究進(jìn)展
        1.2.6 有機(jī)酸代謝研究進(jìn)展
        1.2.7 NF-Y轉(zhuǎn)錄因子家族研究進(jìn)展
    1.3 高通量測(cè)序國(guó)內(nèi)外研究概述
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄組學(xué)概念
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在植物中研究進(jìn)展
    1.4 內(nèi)參基因
    1.5 研究目的與研究?jī)?nèi)容
    1.6 技術(shù)路線
2 無(wú)籽蜜柚生長(zhǎng)發(fā)育和生理生化指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化
    2.1 材料
        2.1.1 試驗(yàn)儀器
        2.1.2 試驗(yàn)試劑
        2.1.3 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 生長(zhǎng)發(fā)育動(dòng)態(tài)指標(biāo)測(cè)定
        2.2.2 蒽酮-濃硫酸比色法測(cè)定可溶性總糖
        2.2.3 考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定可溶性蛋白
        2.2.4 酸堿滴定法測(cè)定有機(jī)酸
        2.2.5 液相色譜法測(cè)定各糖含量
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 無(wú)籽蜜柚生長(zhǎng)發(fā)育期動(dòng)態(tài)物理及汁胞變化
        2.3.2 無(wú)籽蜜柚汁胞發(fā)育期含水量
        2.3.3 無(wú)籽蜜柚汁胞發(fā)育期可溶性蛋白變化及可滴定酸變化
        2.3.4 無(wú)籽蜜柚汁胞發(fā)育期可溶性淀粉變化
        2.3.5 無(wú)籽蜜柚汁胞發(fā)育期可溶性總糖變化
        2.3.6 無(wú)籽蜜柚汁胞發(fā)育期葡萄糖、果糖、蔗糖變化
    2.4 總結(jié)
3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)及糖代謝部分相關(guān)基因的確定
    3.1 材料和方法
        3.1.1 試驗(yàn)儀器
        3.1.2 試驗(yàn)試劑
        3.1.3 試驗(yàn)材料
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 建庫(kù)測(cè)序方法與流程
        3.2.2 無(wú)籽蜜柚汁胞RNA的提取
        3.2.3 無(wú)籽蜜柚汁胞cDNA文庫(kù)構(gòu)建
        3.2.4 生物信息分析流程
        3.2.5 lllumina-Solexa深度測(cè)序
        3.2.6 序列注釋
        3.2.7 unigenes的差異表達(dá)及基因數(shù)字表達(dá)分析
        3.2.8 內(nèi)參基因篩選
        3.2.9 qRT-PCR技術(shù)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 數(shù)字基因表達(dá)(DGE)文庫(kù)的構(gòu)建
        3.3.2 unigene組裝及注釋
        3.3.3 Unigene基礎(chǔ)注釋
        3.3.4 CDS及蛋白序列長(zhǎng)度分布預(yù)測(cè)
        3.3.5 基因差異表達(dá)
        3.3.6 表達(dá)模式聚類結(jié)果分析
        3.3.7 內(nèi)參結(jié)果分析
        3.3.8 糖代謝途徑及部分相關(guān)基因表達(dá)模式
    3.4 總結(jié)
4 SUS、INV基因生物信息學(xué)及表達(dá)分析
    4.1 材料和方法
        4.1.1 Cg-SUS和Cg-INV基因的鑒定獲取及染色體定位
        4.1.2 Cg-SUS和Cg-INV基因理化性質(zhì)、進(jìn)化樹及內(nèi)含子外顯子結(jié)構(gòu)分析
        4.1.3 Cg-SUS和Cg-INV蛋白功能結(jié)構(gòu)域分析
        4.1.4 相關(guān)性分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 Cg-SUS和Cg-INV基因編碼蛋白理化特性分析
        4.2.2 Cg-SUS和Cg-INV基因的分析及染色體定位
        4.2.3 Cg-SUS和Cg-INV基因蛋白進(jìn)化樹及內(nèi)含子、外顯子分析
        4.2.4 Cg-SUS和Cg-INV蛋白功能結(jié)構(gòu)域分析
        4.2.5 qRT-PCR結(jié)果與各糖含量的相關(guān)性分析
    4.3 總結(jié)
5 CgNF-YB9基因克隆及煙草葉片瞬時(shí)表達(dá)
    5.1 材料和方法
        5.1.1 試驗(yàn)試劑
        5.1.2 試驗(yàn)材料
        5.1.3 質(zhì)粒與菌株
        5.1.4 酶和生化試劑
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 無(wú)籽蜜柚CgNF-YB基因家族數(shù)字表達(dá)譜分析
        5.2.2 CgNF-YB9同源轉(zhuǎn)錄子全長(zhǎng)PCR
        5.2.3 線性化載體制備
        5.2.4 插入片段的獲得
        5.2.5 重組反應(yīng)
        5.2.6 重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
        5.2.7 重組產(chǎn)物鑒定
        5.2.8 陽(yáng)性克隆菌落處理
        5.2.9 植物表達(dá)載體向農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
        5.2.10 煙草遺傳轉(zhuǎn)化及瞬時(shí)表達(dá)葉片的篩選與鑒定
        5.2.11 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        5.2.12 熒光定量PCR
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 CgNF-YB基因家族基因數(shù)字表達(dá)譜分析
        5.3.2 CgNF-YB9基因全長(zhǎng)克隆及生物信息學(xué)分析
        5.3.3 基因表達(dá)載體構(gòu)建
        5.3.4 重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
        5.3.5 植物表達(dá)載體向農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        5.3.6 煙草瞬時(shí)表達(dá)
    5.4 總結(jié)
6 討論
    6.1 無(wú)籽蜜柚生理指標(biāo)檢測(cè)
    6.2 無(wú)籽蜜柚轉(zhuǎn)錄組學(xué)及部分相關(guān)基因確定
    6.3 SUS和INV生物信息學(xué)及表達(dá)分析
    6.4 CgNF-YB9功能分析
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3190952