菠菜（Spinacia oleracea L.）是我國重要的經(jīng)濟(jì)型綠葉蔬菜之一,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富,在全世界及我國范圍內(nèi)廣泛種植。菠菜具有耐冷但不耐熱的特性,高溫脅迫嚴(yán)重影響菠菜的生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量,本文以耐熱型菠菜Sp75和熱敏感型菠菜Sp73為研究材料,利用分子生物學(xué)手段研究菠菜Spo PH1參與高溫脅迫應(yīng)答的分子機(jī)制,對(duì)提高菠菜產(chǎn)量及培育耐熱菠菜新品種具有重要意義。PH結(jié)構(gòu)域（Pleckstrin homology domain）,由100-120個(gè)氨基酸組成的功能性區(qū)域,是一種存在于多種信號(hào)蛋白和細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白中的功能性區(qū)域,參與細(xì)胞信號(hào)傳遞,細(xì)胞骨架的構(gòu)成,膜轉(zhuǎn)運(yùn)等。研究Spo PH1對(duì)高溫應(yīng)答調(diào)控作用將為深入解析植物高溫應(yīng)答分子機(jī)制提供重要參考依據(jù)。1.對(duì)菠菜全基因組數(shù)據(jù)庫的分析發(fā)現(xiàn),在菠菜基因組中存在2個(gè)編碼PH蛋白的基因。利用分子PCR技術(shù),克隆到了Spo PH1基因,其最大開放閱讀框?yàn)?50bp,共編碼150個(gè)氨基酸,理論分子質(zhì)量為17.4k Da。2.利用同源序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn),Spo PH蛋白與多種植物的PH蛋白同源性都較高,都含有一個(gè)較為保守的PH結(jié)構(gòu)域,說明PH結(jié)構(gòu)域在... 

【文章來源】：上海師范大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 高溫脅迫對(duì)植物生長(zhǎng)的影響
        1.2.1 高溫脅迫影響植物的抗氧化系統(tǒng)
        1.2.2 高溫脅迫影響植物滲透調(diào)節(jié)
        1.2.3 高溫脅迫影響植物光合作用
    1.3 植物耐熱機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)展
    1.4 植物耐熱機(jī)制的分子生物學(xué)進(jìn)展
    1.5 菠菜高溫脅迫應(yīng)答研究進(jìn)展
        1.5.1 菠菜高溫脅迫應(yīng)答的信號(hào)通路
        1.5.2 菠菜高溫脅迫應(yīng)答的ROS清除途徑
        1.5.3 高溫脅迫誘導(dǎo)菠菜轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控與蛋白加工
    1.6 PH基因的生物學(xué)研究進(jìn)展
        1.6.1 PH結(jié)構(gòu)域
        1.6.2 PH結(jié)構(gòu)域的功能
        1.6.3 含有PH結(jié)構(gòu)域蛋白的功能
    1.7 研究目的及意義
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及質(zhì)粒載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑盒
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所需試劑及培養(yǎng)基的配制
        2.1.5 引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料培養(yǎng)與處理
        2.2.2 菠菜SpoPH1 基因全長(zhǎng)的克隆
        2.2.3 菠菜SpoPH1 生物信息學(xué)研究
        2.2.4 RT-qPCR
        2.2.5 載體構(gòu)建
        2.2.6 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時(shí)表達(dá)
        2.2.7 SpoPH1 轉(zhuǎn)基因酵母耐熱性分析
        2.2.8重組蛋白(His)6-SpoPH1 純化和磷脂酰肌醇結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 植物表達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
第3章 結(jié)果
    3.1 菠菜SpoPH1 基因全長(zhǎng)的克隆
        3.1.1 葉片RNA的提取
        3.1.2 菠菜SpoPH1 基因的克隆
    3.2 菠菜SpoPH1 基因的生物信息學(xué)分析
        3.2.1 SpoPH1 基因全長(zhǎng)的序列分析
        3.2.2 PH蛋白的系統(tǒng)發(fā)育樹分析
        3.2.3 PH蛋白家族多重序列比對(duì)
        3.2.4 SpoPH1 蛋白三維立體模型的構(gòu)建
    3.3 菠菜Sp73和Sp75 高溫處理下SpoPH1/SpoPH2 基因表達(dá)水平分析
    3.4 菠菜SpoPH1 不同發(fā)育時(shí)期的基因表達(dá)
        3.4.1 菠菜六葉期SpoPH1 在不同器官中的表達(dá)
        3.4.2 菠菜抽薹期SpoPH1 在不同器官中的表達(dá)
    3.5 SpoPH1 蛋白的亞細(xì)胞定位
        3.5.1 植物表達(dá)載體pBI121-SpoPH1-GFP的構(gòu)建
        3.5.2 pBI121-SpoPH1-GFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        3.5.3 SpoPH1 蛋白在煙草中的瞬時(shí)表達(dá)
    3.6 SpoPH1 轉(zhuǎn)基因酵母的高溫表型分析
        3.6.1 pYES2-SpoPH1 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.6.2 酵母表達(dá)載體pYES2-SpoPH1 轉(zhuǎn)化野生型酵母
        3.6.3 SpoPH1 轉(zhuǎn)基因酵母的高溫表型分析
    3.7 菠菜SpoPH1 蛋白與磷脂酰肌醇的結(jié)合分析
        3.7.1 原核表達(dá)載體pET32a-SpoPH1 的構(gòu)建
        3.7.2 SpoPH1 蛋白與磷脂酰肌醇的結(jié)合
    3.8 SpoPH1 過表達(dá)擬南芥的篩選
        3.8.1 植物表達(dá)載體pBI121-SpoPH1 的構(gòu)建
        3.8.2 植物表達(dá)載體pBI121-SpoPH1 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        3.8.3 SpoPH1 過表達(dá)擬南芥的篩選
    3.9 AtPH1 突變體的純合驗(yàn)證
    3.10 SpoPH1 回補(bǔ)擬南芥AtPH1 突變體的鑒定
    3.11 菠菜SpoPH1 基因?qū)M南芥表型的影響
第4章 討論
    4.1 菠菜SpoPH1的PH結(jié)構(gòu)域特征
    4.2 菠菜SpoPH1 蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)
    4.3 菠菜SpoPH1 蛋白結(jié)合磷脂酰肌醇參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
    4.4 菠菜SpoPH1 參與高溫脅迫應(yīng)答
    4.5 菠菜SpoPH1 影響擬南芥根的生長(zhǎng)
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高溫脅迫對(duì)文冠果保護(hù)酶系統(tǒng)酶活性的影響研究[J]. 江萍,王小平,王雪蓮,孫向?qū)?牛攀新,杜志敏.  北方園藝. 2008(01)
[2]溫度脅迫對(duì)辣椒部分生理特性的影響[J]. 張子學(xué),張蕊,隋益虎,崔廣榮,張從宇.  安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào). 2007(03)
[3]葡萄對(duì)高溫脅迫的生理學(xué)響應(yīng)研究進(jìn)展[J]. 劉海霞,李曉燕,李連國,王利軍,李紹華.  內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技. 2007(02)
[4]PH結(jié)構(gòu)域中的框架結(jié)構(gòu)[J]. 紀(jì)秀娥,李莉莉,喬傳英,朱美霞,黃江,陳良兵.  醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志. 2007(02)
[5]高溫脅迫下苜蓿生理生化特性研究[J]. 姜義寶,楊玉榮,王成章.  科學(xué)技術(shù)與工程. 2007(05)
[6]蔬菜作物高溫逆境及其耐熱性研究進(jìn)展[J]. 王貴元,林小芳.  安徽農(nóng)學(xué)通報(bào). 2006(11)
[7]蔬菜高溫逆境研究進(jìn)展[J]. 吳俊華,侯雷平,李梅蘭.  北方園藝. 2006(01)
[8]高溫脅迫下不同茄子品種幼苗耐熱性研究[J]. 賈開志,陳貴林.  生態(tài)學(xué)雜志. 2005(04)
[9]干旱地區(qū)造林樹種的水分生理生態(tài)的研究進(jìn)展[J]. 涂璟,王克勤.  西北林學(xué)院學(xué)報(bào). 2003(03)
[10]超氧化物歧化酶（SOD）研究進(jìn)展[J]. 杜秀敏,殷文璇,張慧,趙彥修.  中國生物工程雜志. 2003(01)



本文編號(hào)：3185132