‘神馬’菊花（Dendranthema grandiflorum）是市場上普遍受歡迎的一個(gè)白色秋菊品種,有著悠長的栽培歷史,觀賞、藥用、食用及經(jīng)濟(jì)價(jià)值都極高。菊花在生長和開花的過程中,極易受氣溫變化的影響,尤其是低溫,嚴(yán)重降低其經(jīng)濟(jì)觀賞價(jià)值。MYB轉(zhuǎn)錄因子作為植物最大的轉(zhuǎn)錄因子家族,在植物對外部脅迫環(huán)境的響應(yīng)中起重要作用。本研究以正常條件和低溫脅迫下的‘神馬’菊花葉片為實(shí)驗(yàn)材料,采用單分子實(shí)時(shí)測序技術(shù)與Illumina HiSeqTM 4000雙末端測序技術(shù)對菊花進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)信息的聯(lián)合分析建立了6個(gè)cDNA文庫�？寺〉玫�1個(gè)MYB基因并遺傳轉(zhuǎn)化‘神馬’菊花,對其生理指標(biāo)進(jìn)行測定,驗(yàn)證了轉(zhuǎn)DgMYB1基因菊花的抗寒性,為通過分子生物學(xué)手段提高栽培菊花的耐寒性提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.采用單分子實(shí)時(shí)測序技術(shù)與Illumina HiSeqTM 4000雙末端測序技術(shù)對低溫脅迫下的菊花葉片進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)信息的聯(lián)合分析,建立了6個(gè)cDNA文庫,共獲得8.34 GB數(shù)據(jù),最終獲得3,717,516條subreads數(shù)據(jù),平均長度為2,243bp;獲得305,231條CCS序列,全長re... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物耐寒性的研究概況
        1.1.1 低溫脅迫與保護(hù)酶系統(tǒng)
        1.1.2 低溫脅迫與滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)
        1.1.3 低溫脅迫與膜系統(tǒng)
    1.2 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的研究
        1.2.1 第二代Illumina測序技術(shù)在植物轉(zhuǎn)錄組測序中的應(yīng)用
        1.2.2 第三代SMRT單分子測序技術(shù)在植物中的應(yīng)用
        1.2.3 聯(lián)合測序技術(shù)的應(yīng)用
    1.3 植物MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究
        1.3.1 植物中的MYB轉(zhuǎn)錄因子
        1.3.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子在植物非生物脅迫中的作用
        1.3.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子在低溫調(diào)控中的作用
        1.3.4 MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究現(xiàn)狀以及發(fā)展趨勢
    1.4 研究意義及內(nèi)容
    1.5 技術(shù)路線
第二章 菊花轉(zhuǎn)錄組測序
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料與低溫處理
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菊花總RNA的提取與檢測
        2.2.2 cDNA文庫的制備與上機(jī)測序
        2.2.3 生物信息分析流程
        2.2.4 原始數(shù)據(jù)處理及全長轉(zhuǎn)錄本分析
        2.2.5 轉(zhuǎn)錄本去冗余與基因功能注釋
        2.2.6 基因表達(dá)水平分析
        2.2.7 差異表達(dá)分析
        2.2.8 熒光定量驗(yàn)證
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 轉(zhuǎn)錄組序列組裝及分析
        2.3.2 轉(zhuǎn)錄本去冗余
        2.3.3 轉(zhuǎn)錄本的功能注釋
        2.3.4 基因表達(dá)水平分析
        2.3.5 差異表達(dá)基因分析
        2.3.6 響應(yīng)低溫的菊花差異基因轉(zhuǎn)錄因子
        2.3.7 與抗氧化系統(tǒng)相關(guān)的低溫響應(yīng)基因
        2.3.8 與生物膜系統(tǒng)相關(guān)的低溫響應(yīng)基因
        2.3.9 與冷應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的低溫響應(yīng)基因
        2.3.10 qPCR驗(yàn)證結(jié)果分析
    2.4 討論
        2.4.1 菊花差異基因轉(zhuǎn)錄因子對低溫脅迫的響應(yīng)
        2.4.2 抗氧化相關(guān)的差異基因?qū)栈ǖ蜏孛{迫的響應(yīng)
        2.4.3 生物膜系統(tǒng)相關(guān)的差異基因?qū)栈ǖ蜏孛{迫的響應(yīng)
        2.4.4 冷應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的差異基因?qū)栈ǖ蜏孛{迫的響應(yīng)
第三章 DgMYB1基因的克隆和對菊花的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑和菌株
        3.1.4 引物序列
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 菊花總RNA的提取與檢測
        3.2.2 cDNA的合成和gDNA去除
        3.2.3 引物設(shè)計(jì)與PCR擴(kuò)增
        3.2.4 PCR產(chǎn)物的檢測與膠回收
        3.2.5 PCR回收產(chǎn)物的連接轉(zhuǎn)化
        3.2.6 基因序列分析
        3.2.7 菊花DgMYB1基因表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.8 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
        3.2.9 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化菊花
        3.2.10 轉(zhuǎn)基因陽性植株的鑒定
        3.2.11 轉(zhuǎn)基因植株的表達(dá)
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 DgMYB1全長的獲得
        3.3.2 DgMYB1基因的序列分析
        3.3.3 蛋白的同源性分析及系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹分析
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因植株的獲得及表達(dá)水平
    3.4 討論
第四章 轉(zhuǎn)DgMYB1基因菊花的耐寒性評價(jià)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 低溫脅迫處理
        4.2.2 過表達(dá)DgMYB1菊花幼苗的耐寒性初步鑒定
        4.2.3 低溫脅迫下轉(zhuǎn)基因菊花的生理指標(biāo)測定
        4.2.4 DgMYB1相關(guān)耐寒調(diào)控基因在低溫脅迫處理下的表達(dá)測定
        4.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 低溫脅迫下菊花幼苗生理生化特性的變化
        4.3.2 DgMYB1相關(guān)耐寒調(diào)控基因在低溫脅迫處理下的表達(dá)分析
    4.4 討論
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控炎癥反應(yīng)在高血壓心臟損傷中的分子機(jī)制研究[D]. 李濤濤.首都醫(yī)科大學(xué) 2016
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碩士論文
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[2]低溫誘導(dǎo)下望天樹幼苗葉片生理生化變化及差異蛋白表達(dá)[D]. 馬松亞.廣西大學(xué) 2017
[3]基于葉綠體基因組序列的小麥族系統(tǒng)發(fā)育分析[D]. 程西永.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]低溫脅迫下菊花葉片轉(zhuǎn)錄組比較分析[D]. 郭彤.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[5]銀杏MYB家族基因的克隆及表達(dá)分析[D]. 高云鵬.南京林業(yè)大學(xué) 2016
[6]過表達(dá)SlMPK3對番茄低溫耐受能力的影響[D]. 趙菁菁.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[7]出口切花菊‘白扇’的引種調(diào)查與快繁技術(shù)的研究[D]. 周婷.福建農(nóng)林大學(xué) 2016
[8]兩種短命植物的CBF轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆與抗寒功能鑒定[D]. 張凱.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[9]西瓜非生物脅迫響應(yīng)R2R3MYB轉(zhuǎn)錄因子基因鑒定[D]. 趙爽.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[10]甜菜M14品系BvM14-glyoxalase I基因的克隆與功能分析[D]. 吳川.黑龍江大學(xué) 2012



本文編號：3184165