[目的]獲得尼羅羅非魚淋巴細胞抗原75（OnLy75）基因的cDNA序列和多克隆抗體。[方法]采用RACE技術克隆OnLy75基因的cDNA全序列,通過DNAMAN、MEGA等軟件分析其序列特征;構建OnLy75的原核表達載體,并對其重組蛋白進行原核誘導表達;將純化后的OnLy75重組蛋白免疫新西蘭大耳白兔,并通過Western Blot技術檢測多克隆抗體的效果。[結果]OnLy75的cDNA序列全長為6 632 bp,開放閱讀框5 199 bp,編碼1 732個氨基酸。其OnLy75重組蛋白主要存在于包涵體中;將重組蛋白純化后免疫新西蘭大耳白兔,成功獲得了兔抗OnLy75多克隆抗體。用該多抗對尼羅羅非魚不同器官進行Western Blot內源性檢測,結果顯示該蛋白在精巢中有豐富的表達。[結論]兔抗OnLy75多克隆抗體的成功制備,為進一步深入研究OnLy75在尼羅羅非魚組織中的定位及功能研究提供了工具。 

【文章來源】：生物技術. 2017,27(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 實驗試劑
        1.1.3 儀器
        1.1.4 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 RNA的提取和c DNA的制備
        1.2.2 On Ly75基因部分c DNA序列的獲得
        1.2.3 On Ly75序列分析和同源性比較
        1.2.4 On Ly75原核表達質粒的構建和重組蛋白的誘導表達、條件優(yōu)化及純化
        1.2.5 多克隆抗體的制備和Western Blot檢測抗體特異性
2 結果與分析
    2.1 On Ly75 c DNA的克隆和序列分析
    2.2 同源比較和系統(tǒng)進化分析
    2.3 原核表達
    2.4 重組蛋白表達條件優(yōu)化
    2.5 多克隆抗體制備
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]尼羅羅非魚補體C9基因的克隆和組織表達分析[J]. 胡欣欣,曹建萌,盧邁新,陳瓊,陳昆平.  淡水漁業(yè). 2017(01)
[2]世界羅非魚生產(chǎn)和貿易現(xiàn)狀分析[J]. 張紅燕,袁永明,賀艷輝,王紅衛(wèi),代云云.  農業(yè)展望. 2016(05)
[3]羅非魚無乳鏈球菌LrrG蛋白的原核表達及免疫原性分析[J]. 陳雪,可小麗,盧邁新,劉志剛,高風英,朱華平,曹建萌.  水產(chǎn)學報. 2014(05)
[4]CD205的結構與功能研究[J]. 盧曉,陳政良.  國外醫(yī)學(分子生物學分冊). 2002(05)

博士論文
[1]羅非魚基因敲除技術的建立及其在性別決定與分化研究中的應用[D]. 李明輝.西南大學 2014
[2]羅非魚無乳鏈球菌病病原學、病理學及cpsE基因的原核表達研究[D]. 黃錦爐.四川農業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]羅非魚補體C3的克隆及無乳鏈球菌C5a肽酶免疫前后的組織表達分析[D]. 李曉恬.上海海洋大學 2016
[2]無乳鏈球菌cpsE基因的克隆、原核表達和多克隆抗體制備及其在原位PCR中的應用[D]. 付希.四川農業(yè)大學 2012
[3]重組FHL2的原核表達、純化及抗血清的制備[D]. 張弟.南方醫(yī)科大學 2008



本文編號：3183449