[目的]獲得尼羅羅非魚淋巴細(xì)胞抗原75（OnLy75）基因的cDNA序列和多克隆抗體。[方法]采用RACE技術(shù)克隆OnLy75基因的cDNA全序列,通過DNAMAN、MEGA等軟件分析其序列特征;構(gòu)建OnLy75的原核表達(dá)載體,并對(duì)其重組蛋白進(jìn)行原核誘導(dǎo)表達(dá);將純化后的OnLy75重組蛋白免疫新西蘭大耳白兔,并通過Western Blot技術(shù)檢測(cè)多克隆抗體的效果。[結(jié)果]OnLy75的cDNA序列全長(zhǎng)為6 632 bp,開放閱讀框5 199 bp,編碼1 732個(gè)氨基酸。其OnLy75重組蛋白主要存在于包涵體中;將重組蛋白純化后免疫新西蘭大耳白兔,成功獲得了兔抗OnLy75多克隆抗體。用該多抗對(duì)尼羅羅非魚不同器官進(jìn)行Western Blot內(nèi)源性檢測(cè),結(jié)果顯示該蛋白在精巢中有豐富的表達(dá)。[結(jié)論]兔抗OnLy75多克隆抗體的成功制備,為進(jìn)一步深入研究OnLy75在尼羅羅非魚組織中的定位及功能研究提供了工具。 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù). 2017,27(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1.3 儀器
        1.1.4 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 RNA的提取和c DNA的制備
        1.2.2 On Ly75基因部分c DNA序列的獲得
        1.2.3 On Ly75序列分析和同源性比較
        1.2.4 On Ly75原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、條件優(yōu)化及純化
        1.2.5 多克隆抗體的制備和Western Blot檢測(cè)抗體特異性
2 結(jié)果與分析
    2.1 On Ly75 c DNA的克隆和序列分析
    2.2 同源比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.3 原核表達(dá)
    2.4 重組蛋白表達(dá)條件優(yōu)化
    2.5 多克隆抗體制備
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]尼羅羅非魚補(bǔ)體C9基因的克隆和組織表達(dá)分析[J]. 胡欣欣,曹建萌,盧邁新,陳瓊,陳昆平.  淡水漁業(yè). 2017(01)
[2]世界羅非魚生產(chǎn)和貿(mào)易現(xiàn)狀分析[J]. 張紅燕,袁永明,賀艷輝,王紅衛(wèi),代云云.  農(nóng)業(yè)展望. 2016(05)
[3]羅非魚無(wú)乳鏈球菌LrrG蛋白的原核表達(dá)及免疫原性分析[J]. 陳雪,可小麗,盧邁新,劉志剛,高風(fēng)英,朱華平,曹建萌.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2014(05)
[4]CD205的結(jié)構(gòu)與功能研究[J]. 盧曉,陳政良.  國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè)). 2002(05)

博士論文
[1]羅非魚基因敲除技術(shù)的建立及其在性別決定與分化研究中的應(yīng)用[D]. 李明輝.西南大學(xué) 2014
[2]羅非魚無(wú)乳鏈球菌病病原學(xué)、病理學(xué)及cpsE基因的原核表達(dá)研究[D]. 黃錦爐.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]羅非魚補(bǔ)體C3的克隆及無(wú)乳鏈球菌C5a肽酶免疫前后的組織表達(dá)分析[D]. 李曉恬.上海海洋大學(xué) 2016
[2]無(wú)乳鏈球菌cpsE基因的克隆、原核表達(dá)和多克隆抗體制備及其在原位PCR中的應(yīng)用[D]. 付希.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]重組FHL2的原核表達(dá)、純化及抗血清的制備[D]. 張弟.南方醫(yī)科大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3183449