細(xì)胞壁完整性途徑（CWI-MAPK）是真核細(xì)胞中重要的MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一,該途徑主要參與調(diào)控細(xì)胞壁組分的生物合成和細(xì)胞周期。SLT2基因是真菌CWI-MAPK途徑中重要的MAPK基因,該類基因與真菌的細(xì)胞壁完整性密切相關(guān),但在玉米大斑病菌中有關(guān)該類基因的功能尚未見報道。本研究利用生物信息學(xué)技術(shù),在玉米大斑病菌中鑒定出了釀酒酵母的ScSLT2的同源基因,將其命名為StSLT2,并分析了該基因結(jié)構(gòu)特征;進(jìn)一步利用靶基因敲除技術(shù),獲得了該基因敲除突變體,通過比較突變體與野生型（WT）菌株在生長發(fā)育、細(xì)胞壁形態(tài)建成及致病性等方面的差異,初步明確了該基因的功能。該研究不僅明確了玉米大斑病菌StSLT2的功能,也為進(jìn)一步闡釋CWI-MAPK的調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.通過與釀酒酵母的ScSLT2基因進(jìn)行比對,在玉米大斑病菌數(shù)據(jù)庫中鑒定得到了SLT2同源基因,將其命名為StSLT2。利用生物信息學(xué)技術(shù)分析了該基因的結(jié)構(gòu)特征,發(fā)現(xiàn)該基因DNA全長為5842 bp,cDNA全長為3105 bp,包含13個外顯子和12個內(nèi)含子,編碼1034個氨基酸;該蛋白包含S TKc保守結(jié)構(gòu)域,在... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮寫詞表
1 引言
    1.1 玉米大斑病及其致病病原菌
    1.2 MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路概述
    1.3 模式真菌釀酒酵母中的MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    1.4 病原真菌中CWI-MAPK途徑的研究現(xiàn)狀
    1.5 真菌的細(xì)胞壁組成及功能
    1.6 本研究目的與意義
2 材料和方法
    2.1 菌株與質(zhì)粒
    2.2 培養(yǎng)基
    2.3 試劑及配制
    2.4 主要儀器
    2.5 玉米大斑病菌StSLT2 基因的生物信息學(xué)分析
        2.5.1 玉米大斑病菌StSLT2 的鑒定
        2.5.2 生物信息學(xué)分析
        2.5.3 StSLT2 的同源序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.5.4 玉米大斑病菌StSLT2 基因在不同發(fā)育時期的表達(dá)模式
    2.6 玉米大斑病菌StSLT2 基因敲除載體的構(gòu)建
        2.6.1 全基因組DNA的提取
        2.6.2 StSLT2 基因側(cè)翼序列及草銨膦(BAR)基因序列的PCR擴(kuò)增
        2.6.3 目的片段的回收、連接、轉(zhuǎn)化與測序
        2.6.4 StSLT2 基因側(cè)翼片段與基因敲除載體pBluescriptⅡSK(-)的拼接
    2.7 玉米大斑病菌StSLT2 基因敲除突變體的獲得和驗(yàn)證
        2.7.1 原生質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化及抗性篩選
        2.7.2 StSLT2 基因敲除突變體的驗(yàn)證
    2.8 玉米大斑病菌StSLT2 基因的功能分析
        2.8.1 StSLT2 基因?qū)Σ【L發(fā)育的影響
        2.8.2 StSLT2 基因?qū)?xì)胞壁發(fā)育的影響
        2.8.3 StSLT2 基因?qū)Σ【街l(fā)育的影響
3 結(jié)果與分析
    3.1 玉米大斑病菌StSLT2 基因的生物信息學(xué)分析
        3.1.1 StSLT2 的鑒定和理化性質(zhì)預(yù)測
        3.1.2 StSLT2 基因結(jié)構(gòu)分析
        3.1.3 StSLT2 保守結(jié)構(gòu)域和磷酸化位點(diǎn)分析
        3.1.4 玉米大斑病菌St SLT2 蛋白二級結(jié)構(gòu)特征和亞細(xì)胞定位分析
        3.1.5 StSLT2 的同源序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.2 玉米大斑病菌StSLT2 基因敲除載體的構(gòu)建
        3.2.1 StSLT2 基因側(cè)翼序列及BAR基因擴(kuò)增
        3.2.2 StSLT2-pBS敲除載體的酶切驗(yàn)證
    3.3 玉米大斑病菌StSLT2 基因敲除突變體的獲得
        3.3.1 突變體草銨膦抗性篩選
        3.3.2 StSLT2 敲除突變體BAR基因的PCR驗(yàn)證
        3.3.3 StSLT2 敲除突變體的特異引物驗(yàn)證
        3.3.4 StSLT2 敲除突變體的RT-PCR驗(yàn)證
    3.4 玉米大斑病菌StSLT2 基因的功能分析
        3.4.1 StSLT2 的表達(dá)模式分析
        3.4.2 StSLT2 基因?qū)Σ【L發(fā)育的影響
        3.4.3 StSLT2 基因?qū)Σ【?xì)胞壁發(fā)育影響
        3.4.4 StSLT2 基因突變體致病性測定
4 討論
    4.1 真菌中的SLT2 同源基因參與細(xì)胞的極性生長
    4.2 植物病原真菌中的SLT2 同源基因?qū)Σ【L發(fā)育的影響
    4.3 植物病原真菌中SLT2 同源基因?qū)Σ【虏⌒缘挠绊?br>5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
作者簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]稻瘟病菌G蛋白及MAPK信號途徑相關(guān)基因的功能分析[D]. 張海峰.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]UvMPS1基因在對水稻稻曲菌營養(yǎng)生長和壓力應(yīng)激方面的重要作用[D]. 王藝.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016



本文編號：3181726