植物細胞高度分隔成不同的膜亞細胞結(jié)構(gòu),在不同的地點適當?shù)匮b配相關(guān)的蛋白來執(zhí)行特定的細胞反應。細胞核是細胞的控制中心,以高度協(xié)調(diào)的方式進行蛋白質(zhì)表達和運輸。細胞核定位信號（nuclear localization signal, NLS）能夠促進蛋白定位于細胞核中,對研究蛋白的細胞生物學功能有重要作用�；谀壳癗LS植物表達載體存在局限性,本研究用無縫克隆技術(shù),將NLS與綠色熒光蛋白基因（green fluorescent protein gene, GFP）融合,插入植物雙元表達載體pRI101-AN中,獲得一個新的p RI101-NLS-GFP植物表達載體。利用農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens）介導瞬時表達體系在本氏煙（Nicotiana benthamiana）中表達pRI101-NLS-GFP,以未融合NLS的pRI101-GFP為對照,熒光觀察表明NLS-GFP融合蛋白主要聚集在細胞核,而pRI101-GFP熒光遍布整個細胞。同時利用馬鈴薯晚疫病致病疫霉菌（Phytophthora infestans）分泌的精氨酸-某氨基酸-亮氨酸-精氨酸（argin... 

【文章來源】：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報. 2020,28(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料與主要試劑
    1.2 GFP和NLS-GFP融合基因的獲得
    1.3 p RI101-GFP和p RI101-NLS-GFP表達載體構(gòu)建
    1.4 p RI101-GFP-PITG＿04314和p RI101-NLS-GFP-PITG＿04314表達載體構(gòu)建
    1.5 農(nóng)桿菌介導的基因瞬時表達分析
    1.6 致病疫霉菌接種和病斑面積統(tǒng)計
2 結(jié)果與分析
    2.1 GFP和NLS-GFP融合基因的克隆
    2.2 重組表達質(zhì)粒p RI101-GFP和p RI101-NLS-GFP的構(gòu)建及亞細胞定位
    2.3 重組表達質(zhì)粒p RI101-GFP-PITG＿04314和p RI101-NLS-GFP-PITG＿04314的構(gòu)建及亞細胞定位
    2.4 效應蛋白PITG＿04314的毒性功能分析
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物細胞質(zhì)介導GFP-NLS蛋白入核轉(zhuǎn)運的HeLa細胞系統(tǒng)的建立[J]. 李瑞沙,洪強,周樹敏,張紅莉,李楊,張衛(wèi).  中國生物化學與分子生物學報. 2017(01)
[2]農(nóng)桿菌介導的pCB302-3載體在本氏煙中瞬時表達條件優(yōu)化[J]. 孫春蓮,王洪洋,田振東.  華中農(nóng)業(yè)大學學報. 2015(03)
[3]幾種新型植物基因表達載體的構(gòu)建方法[J]. 張陽璞,楊淑慎.  生物工程學報. 2015(03)
[4]細胞核在植物防御反應中的作用[J]. 尹超,李梅,劉昱輝.  生物技術(shù)進展. 2013(01)
[5]馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)狀與發(fā)展[J]. 謝從華.  華中農(nóng)業(yè)大學學報(社會科學版). 2012(01)
[6]一種快速高效構(gòu)建植物表達載體的方法[J]. 韓凱,翁建峰,郝轉(zhuǎn)芳,李新海,李明順,張德貴,白麗,張世煌,薛吉全,謝傳曉.  玉米科學. 2012(01)



本文編號：3181890