固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白120（Sterol20regulatory20element-binding20protein201,SREBP1）通過(guò)調(diào)控脂肪生成相關(guān)的酶基因的轉(zhuǎn)錄,在機(jī)體脂類代謝調(diào)控中起著重要作用.本研究以21日齡的雞胚肝組織的cDNA為模板,通過(guò)PCR分段克隆Srebp1全長(zhǎng)基因的編碼區(qū)片段,采用生物信息學(xué)分析其蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)域,將SREBP1功能結(jié)構(gòu)域的編碼片段克隆入原核表達(dá)載體pCold20Ⅲ中,在大腸桿菌BL21（DE3）進(jìn)行該功能片段的誘導(dǎo)表達(dá).結(jié)果表明利用該基因內(nèi)的KpnⅠ和NotⅠ兩個(gè)限制性酶切位點(diǎn),成功將雞Srebp1基因上分別長(zhǎng)700,120300,12050020bp203個(gè)片段依次插入pcDNA3.1（+）質(zhì)粒的Hind20Ⅲ和XhoⅠ酶切位點(diǎn)之間,獲得全長(zhǎng)Srebp1基因編碼片段;在15℃和異丙基硫代半乳糖苷（Isopropyl20β-D-Thiogalactoside,IPTG）的誘導(dǎo)條件下,pCold20Ⅲ-g20Srebp1-1125重組表達(dá)質(zhì)粒在大腸桿菌BL21（DE3）中成功表達(dá)出重組蛋白gSREBP1-1125;SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示... 

【文章來(lái)源】：常熟理工學(xué)院學(xué)報(bào). 2020,34(05)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 雞Srebp1基因全長(zhǎng)編碼區(qū)片段的克隆
        1.2.2 雞SREBP1蛋白質(zhì)序列結(jié)構(gòu)分析
        1.2.3 雞SREBP1功能多肽的原核重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.4 gSREBP1-1125重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.5 從菌體中初步分離gSREBP1-1125重組蛋白
        1.2.6 可溶性表達(dá)的gSREBP1-1125重組蛋白的層析
        1.2.7 從包涵體中純化獲得可溶性gSREBP1-1125重組蛋白
2 結(jié)果與分析
    2.1 雞Srebp1基因編碼區(qū)片段的克隆
    2.2 雞SREBP1蛋白序列和結(jié)構(gòu)分析
    2.3 雞SREBP1功能多肽片段的重組原核表達(dá)載體構(gòu)建
    2.4 重組蛋白gSREBP1-1125的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.5 重組蛋白gSREBP1-1125的純化
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞HNF4α蛋白的原核表達(dá)、純化及特異性抗體制備[J]. 王中亮,胡悅,郁建鋒,陳玨,馬麗晨,陳遲遲,姚文,顧志良.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(05)
[2]雞HNF1α在大腸桿菌中的表達(dá)及其純化[J]. 郁建鋒,張蕓,王中亮,李潔,張燕萍,龔道清,顧志良.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2018(03)
[3]雞SREBP1基因抗血清制備及組織表達(dá)特性分析[J]. 王麗,那威,王宇祥,王彥博,王寧,李玉茂,李輝.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2010(12)



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