玉米是主要的糧食作物,也是飼料和工業(yè)重要的原料。害蟲和雜草一直是限制玉米產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素。為了降低害蟲和雜草對(duì)玉米生長發(fā)育造成的危害,人們開始利用化學(xué)方法進(jìn)行蟲害草害治理,但是由此帶來的弊端也逐漸增多。隨著生物技術(shù)的發(fā)展,利用基因工程技術(shù),向玉米中導(dǎo)入抗蟲耐除草劑基因,培育出具有抗蟲和耐除草劑性狀的轉(zhuǎn)基因玉米,它能有效的防治蟲害和草害,且對(duì)環(huán)境、有益昆蟲及人畜均無不良影響。Bt cry2Ah基因是從蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis,Bt）菌株中克隆的,具有殺蟲活性的蛋白基因。根據(jù)植物密碼子偏好性,本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)Bt cry2Ah基因進(jìn)行了密碼子優(yōu)化和改造,將改造后的基因Bt cry2Ah-vp和草銨膦抗性基因bar構(gòu)建表達(dá)載體,用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入玉米自交系B104,獲得了T₀代轉(zhuǎn)基因玉米,通過草銨膦篩選,獲得了一個(gè)高抗草銨膦的株系命名為VP1-5,并對(duì)其進(jìn)行了分子檢測(cè)和抗蟲性篩選。本研究對(duì)轉(zhuǎn)Bt cry2Ah-vp基因玉米VP1-5進(jìn)行了分子水平檢測(cè)和農(nóng)藝性狀調(diào)查。采用PCR、Southern blot、RT-PCR、熒光定量P... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 Bt殺蟲基因
        1.1.1 Bt殺蟲基因概況
        1.1.2 Bt基因的分類和命名
        1.1.3 Bt基因殺蟲機(jī)制
    1.2 轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲玉米的研究進(jìn)展
        1.2.1 國外轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲玉米的研究進(jìn)展
        1.2.2 國內(nèi)轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲玉米的研究進(jìn)展
    1.3 Bt cry2Ah基因
        1.3.1 Bt cry2Ah基因概述
        1.3.2 Cry2Ah蛋白抗蟲性分析與轉(zhuǎn)基因作物研究
    1.4 玉米轉(zhuǎn)化及提高外源基因表達(dá)量的研究
        1.4.1 基因改造
        1.4.2 玉米轉(zhuǎn)化方法
        1.4.3 轉(zhuǎn)基因植物的篩選標(biāo)記基因
    1.5 轉(zhuǎn)基因植物的遺傳穩(wěn)定性分析
        1.5.1 DNA水平分析
        1.5.2 RNA水平分析
        1.5.3 蛋白表達(dá)水平分析
        1.5.4 生物測(cè)定
        1.5.5 農(nóng)藝性狀調(diào)查
    1.6 本研究的目的和意義
    1.7 技術(shù)路線
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物表達(dá)載體
        2.1.2 玉米材料
        2.1.3 供試蟲源
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 酶和化學(xué)制劑
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)中用到的各種引物
    2.2 常用試劑配制
        2.2.1 玉米基因組DNA的提取試劑
        2.2.2 玉米總RNA的提取試劑
        2.2.3 Southern Blot雜交試劑
        2.2.4 ELISA試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 玉米材料的種植
        2.3.2 玉米基因組DNA的提取
        2.3.3 轉(zhuǎn)基因玉米的草銨膦抗性篩選及Bar試紙條檢測(cè)
        2.3.4 PCR檢測(cè)玉米轉(zhuǎn)基因植株
        2.3.5 Southern Blot雜交
        2.3.6 玉米總RNA的提取
        2.3.7 RT-PCR
        2.3.8 熒光定量PCR
        2.3.9 ELISA檢測(cè)
        2.3.10 轉(zhuǎn)基因玉米的抗蟲性鑒定
        2.3.11 轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米的農(nóng)藝性狀考察
        2.3.12 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 T0 代轉(zhuǎn)基因植株和VP1-5 的獲得
    3.2 轉(zhuǎn)cry2Ah-vp基因玉米的分子檢測(cè)
        3.2.1 轉(zhuǎn)化植株的草銨膦篩選和試紙條檢測(cè)
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因植株Southern blot檢測(cè)
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的RT-PCR檢測(cè)
        3.2.5 轉(zhuǎn)基因植株的熒光定量PCR檢測(cè)
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因植株的ELISA檢測(cè)
    3.3 轉(zhuǎn)基因植株的生物活性檢測(cè)
        3.3.1 轉(zhuǎn)基因植株的室內(nèi)生物活性檢測(cè)
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因植株的田間生物活性檢測(cè)
    3.4 轉(zhuǎn)cry2Ah-vp基因玉米的農(nóng)藝性狀分析
        3.4.1 轉(zhuǎn)基因?qū)τ衩咨诘挠绊?br>        3.4.2 轉(zhuǎn)基因?qū)τ衩字旮�、穗位及產(chǎn)量性狀的影響
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黏蟲生物防治研究進(jìn)展[J]. 楊燦,母銀林,王潔,陳祥盛.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2021(04)



本文編號(hào)：3174680