肌醇半乳糖苷合成酶（galactinol synthase,簡(jiǎn)稱GolS）是棉子糖系列寡糖（raffinose family oligosaccharides,簡(jiǎn)稱RFOs）生物合成途徑中的關(guān)鍵酶,在植物應(yīng)對(duì)非生物脅迫的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄（RT）-PCR從大豆葉片cDNA中擴(kuò)增得到編碼肌醇半乳糖苷合成酶的基因GmGolS,再將GmGolS基因構(gòu)建到原核表達(dá)載體pET28上,然后將載體導(dǎo)入大腸桿菌Rosetta（DE3）中,對(duì)其進(jìn)行異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalacto pyranoside,簡(jiǎn)稱IPTG）誘導(dǎo)。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,簡(jiǎn)稱SDS-PAGE）結(jié)果表明,在誘導(dǎo)時(shí)間為3 h、IPTG濃度為0.1 mmol/L的條件下,可以獲得大量重組蛋白,分子量約為40 ku。對(duì)表達(dá)GmGolS蛋白的大腸桿菌進(jìn)行抗旱性分析的結(jié)果顯示,GmGolS基因在大腸桿菌中的過(guò)表達(dá)降低了重組菌的生活力,使其對(duì)干旱脅迫更加敏... 

【文章來(lái)源】：江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(14)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 大豆葉片總RNA的提取及cDNA反轉(zhuǎn)錄
        1.2.2 目的基因的擴(kuò)增
        1.2.3 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.4 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.5 表達(dá)GmGolS蛋白的大腸桿菌干旱脅迫分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 GmGolS基因的克隆
    2.2 GmGolS基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.4 表達(dá)GmGolS蛋白的大腸桿菌干旱脅迫分析
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]橡膠樹(shù)炭疽菌CsPbs2基因的原核表達(dá)分析[J]. 廖小淼,何其光,劉耀,徐良向,龍熙平,劉文波,張宇,林春花,繆衛(wèi)國(guó).  分子植物育種. 2019(07)
[2]稻瘟病菌Dam1基因的克隆、原核表達(dá)及純化[J]. 許雨晨,呂哲,陳保善,彭好文.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2016(09)
[3]鹽芥TsGPX3基因的克隆、亞細(xì)胞定位與原核表達(dá)[J]. 王寧,陳靜,高飛,李華云,隋欣,周宜君.  生物技術(shù)通報(bào). 2016(04)
[4]木薯中肌醇半乳糖苷合成酶基因在大腸桿菌中的表達(dá)[J]. 范潔,王雨晴,李瑞梅,張帆,段瑞軍,符少萍,劉姣,胡新文,郭建春.  分子植物育種. 2015(05)
[5]高粱SbGABA-Ts基因的克隆、原核表達(dá)及純化[J]. 楊澤偉,王龍海,朱莉,汪海,黃大昉,郎志宏.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(05)
[6]GA2ox1氧化酶基因的克隆及原核表達(dá)[J]. 常麗,趙小英,郭明,林建中,李秀山,劉選明.  西北植物學(xué)報(bào). 2010(06)

碩士論文
[1]鹽藻DsRab基因的載體構(gòu)建、原核表達(dá)及亞細(xì)胞定位分析[D]. 李秀娟.大連海洋大學(xué) 2014
[2]沙冬青耐寒基因AmGolS的克隆和遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 宋健.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3164052