銅鋅超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD,CSD）是植物中主要的活性氧清除劑,CSD的激活主要有CCS依賴(lài)途徑和非CCS依賴(lài)途徑。為研究CCS與CSD1在低溫脅迫下的關(guān)聯(lián)性,利用雙基因植物二元表達(dá)載體,構(gòu)建了過(guò)量表達(dá)CSD1（細(xì)胞質(zhì)CSD）和CCS的pBD-EuCSD1+CCS以及過(guò)量表達(dá)CSD1同時(shí)CCS沉默的pBD-EuCSD1+antiCCS雙基因植物二元表達(dá)載體。本文通過(guò)優(yōu)化巨尾桉轉(zhuǎn)化再生體系再生出轉(zhuǎn)pBD-EuCSD1+CCS和pBDEuCSD1+antiCCS巨尾桉,篩選出轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性巨尾桉;比較轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性巨尾桉的抗寒性,篩選得到抗寒性強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因巨尾桉;對(duì)其進(jìn)行生理生化研究,探究CCS與巨尾桉抗寒性的關(guān)系。結(jié)果如下:優(yōu)化了巨尾桉轉(zhuǎn)化再生體系:采用巨尾桉的莖為再生材料;芽分化培養(yǎng)基為:1/2 MS+0.1 g肌醇+30 g蔗糖+0.05 mg/L TDZ+0.5 mg/LNAA;芽生長(zhǎng)培養(yǎng)基為:1/2 MS+0.1 g肌醇+30 g蔗糖+0.3 mg/L 6-BA+0.15 mg/L IBA。通過(guò)檢測(cè)篩選,得到了16株轉(zhuǎn)pBD-EuCSD1+CCS陽(yáng)性巨尾桉,10株轉(zhuǎn)pBDEuC... 

【文章來(lái)源】：華僑大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)對(duì)照表
第1章 引言
    1.1 ROS研究進(jìn)展
        1.1.1 ROS的產(chǎn)生和作用
        1.1.2 植物中ROS的清除方式
    1.2 Cu/ZnSOD研究進(jìn)展
        1.2.1 Cu/ZnSOD的作用機(jī)制
        1.2.2 Cu/ZnSOD提高植物的抗逆性與轉(zhuǎn)基因植物
    1.3 CCS研究進(jìn)展
        1.3.1 CCS的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 依賴(lài)CCS的 Cu/ZnSOD激活途徑
        1.3.3 不依賴(lài)CCS的 Cu/ZnSOD激活途徑
    1.4 本論文研究意義及課題來(lái)源
第2章 巨尾桉轉(zhuǎn)化再生體系的優(yōu)化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 最佳芽分化培養(yǎng)基的篩選
        2.2.2 最佳分化材料的優(yōu)化
        2.2.3 最佳芽生長(zhǎng)培養(yǎng)基的篩選
        2.2.4 葉片不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)
        2.2.5 芽分化培養(yǎng)
        2.2.6 芽生長(zhǎng)培養(yǎng)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 不同激素對(duì)芽分化的影響
        2.3.2 不同再生材料對(duì)芽分化的影響
        2.3.3 不同芽生長(zhǎng)培養(yǎng)基對(duì)芽生長(zhǎng)的影響
        2.3.4 生根培養(yǎng)基對(duì)巨尾桉生根的影響
    2.4 總結(jié)與討論
第3章 EuCSD1+CCS與 EuCSD1+antiCCS雙基因轉(zhuǎn)化巨尾桉
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 土壤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的巨尾桉轉(zhuǎn)化
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因巨尾桉DNA水平陽(yáng)性檢測(cè)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 EuCSD1+CCS與 EuCSD1+antiCCS雙基因轉(zhuǎn)化巨尾桉
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因巨尾桉PCR檢測(cè)
    3.4 總結(jié)與討論
第4章 轉(zhuǎn)EuCSD1+CCS與轉(zhuǎn)EuCSD1+antiCCS基因巨尾桉抗寒性研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 轉(zhuǎn)基因巨尾桉抗寒性檢測(cè)
        4.2.2 巨尾桉組培苗馴化
        4.2.3 NBT法檢測(cè)SOD酶活
        4.2.4 巨尾桉總RNA提取
        4.2.5 QPCR反應(yīng)
        4.2.6 轉(zhuǎn)基因巨尾桉中木質(zhì)素含量的測(cè)定
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 EuCSD1+CCS和 EuCSD1+antiCCS巨尾桉抗凍性檢測(cè)
        4.3.2 EuCSD1+CCS和 EuCSD1+antiCCS巨尾桉組培苗馴化
        4.3.3 EuCSD1+CCS和 EuCSD1+antiCCS巨尾桉SOD酶活檢測(cè)
        4.3.4 EuCSD1+CCS與 EuCSD1+antiCCS巨尾桉中CSD1、CCS、GR的相對(duì)表達(dá)量分析
        4.3.5 EuCSD1+CCS與 EuCSD1+antiCCS巨尾桉中木質(zhì)素含量比較分析..
    4.4 總結(jié)與討論
第5章 總結(jié)與展望
    5.1 研究總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過(guò)表達(dá)EuCuZnSOD提高巨尾桉的耐寒性研究[J]. 趙艷玲,韓瑤,靳玉蕾.  廣西植物. 2018(01)

碩士論文
[1]抗寒低木質(zhì)素巨尾桉的定向培育研究[D]. 靳玉蕾.華僑大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3162162