目的:探討腺病毒介導(dǎo)的人凝血因子IX（hFIX）基因在小鼠脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cell,ADSC）中的表達(dá)。方法:體外分離培養(yǎng)小鼠脂肪干細(xì)胞,觀察其細(xì)胞形態(tài),CCK-8法測定其生長活力,流式細(xì)胞術(shù)鑒定其細(xì)胞表型CD29、CD90、CD45,成脂成骨誘導(dǎo)鑒定其分化能力。將攜帶hIX基因的腺病毒轉(zhuǎn)染小鼠脂肪干細(xì)胞,對比觀察其與未轉(zhuǎn)染時細(xì)胞形態(tài)及生長曲線有無變化。RT-PCR檢測hFIX基因在細(xì)胞中的表達(dá),Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)及培養(yǎng)細(xì)胞上清液中hFIX蛋白的表達(dá)。ELISA法檢測細(xì)胞上清液中的hFIX蛋白量（The antigen content of hFIX,FIX:Ag）,一期法檢測培養(yǎng)細(xì)胞上清液中hFIX蛋白活性（The clotting factor activity of hFIX,FIX:C）。結(jié)果:小鼠ADSC離體培養(yǎng)最初幾小時呈體積較小的圓球形,具有很強(qiáng)的折光性,貼壁生長時間為種瓶后4-6 h,種瓶后72 h細(xì)胞變?yōu)殚L梭形纖維狀,呈漩渦狀排列;第3代ADSC體外培養(yǎng)1-2 d生長速度較緩慢,3-5 d增殖速度增快,呈指數(shù)倍擴(kuò)增... 

【文章來源】：中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2020,28(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    試劑與儀器
    ADSC的分離培養(yǎng)
    ADSC生長曲線的CCK-8法檢測
    成脂誘導(dǎo)分化
    成骨誘導(dǎo)分化
    ADSC表型的流式細(xì)胞術(shù)鑒定
    攜帶hF IX基因的腺病毒轉(zhuǎn)染ADSC
    細(xì)胞內(nèi)hF IX蛋白表達(dá)的Western blot檢測
    細(xì)胞上清hF IX蛋白表達(dá)的Western blot檢測
    細(xì)胞上清FIX:Ag的ELISA法測定
    細(xì)胞上清FIX:C的一期法測定
    統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    細(xì)胞的生長及形態(tài)學(xué)特點(diǎn)
    ADSC生長曲線
    成脂誘導(dǎo)結(jié)果
    成骨誘導(dǎo)結(jié)果
    ADSC細(xì)胞表型流式細(xì)胞儀的檢測結(jié)果
    攜帶hF IX腺病毒轉(zhuǎn)染ADSC
    細(xì)胞中hF IX mRNA的表達(dá)
    細(xì)胞上清中hF IX蛋白的表達(dá)
    細(xì)胞上清液中FIX:Ag的分泌情況
    細(xì)胞上清液中FIX:C的分泌情況
討論



本文編號：3154751