溶瘤病毒（Oncolytic viruses）是一種重要的癌癥免疫治療策略。經(jīng)過基因編輯技術(shù)改造后的二型單純皰疹病毒（herpes simplex virus type II,HSVⅡ）能夠選擇性的在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制和增殖,直接殺死腫瘤細(xì)胞。伴隨溶瘤病毒的增殖:a)腫瘤微環(huán)境對抗腫瘤的免疫機(jī)制得以部分解除;b)腫瘤細(xì)胞在裂解時釋放特異性的腫瘤抗原激活腫瘤微環(huán)境中特異性的抗腫瘤免疫反應(yīng);c)溶瘤病毒在腫瘤微環(huán)境中表達(dá)增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子等。白介素15（Interleukin-15,IL-15）是14至15kDa的細(xì)胞因子。IL-15可通過抗體依賴性介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（antibody dependent cell mediated cytotoxicity,ADCC）效應(yīng)增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（NK）和巨噬細(xì)胞的抗腫瘤作用。IL-15與特異性靶向腫瘤細(xì)胞的抗體聯(lián)合治療時,IL-15能夠上調(diào)NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上Fc受體表達(dá),抗體與腫瘤的抗原結(jié)合后,抗體的Fc片段與Fc受體結(jié)合時促進(jìn)NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞。CRISPR/Cas9（clustered regular interspaced... 

【文章來源】：湖北工業(yè)大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1.1 惡性腫瘤的研究和治療現(xiàn)狀
    1.2 溶瘤病毒免疫治療歷史
    1.3 溶瘤病毒療法的機(jī)遇和挑戰(zhàn)
    1.4 基因編輯技術(shù)
    1.5 白介素15
    1.6 目的和意義
第2章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        2.1.3 溶液配方
        2.1.4 細(xì)胞系及病毒株
        2.1.5 小鼠
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 oHSV2 的生產(chǎn)
        2.2.3 腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2.4 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.5 病毒構(gòu)建
        2.2.6 病毒基因PCR分析
        2.2.7 IL-15ELISA分析
        2.2.8 病毒體外殺傷腫瘤細(xì)胞
        2.2.9 qPCR分析病毒感染腫瘤細(xì)胞后PD-L1 的表達(dá)
        2.2.10 CT26 腫瘤模型建立
        2.2.11 統(tǒng)計方法
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 CRISPR/CAS9 構(gòu)建OHSV2-MIL-15CFP時出現(xiàn)了非同源重組修復(fù)（NHEJ）
    3.2 鑒定OHSV2-MIL-15CFP
    3.3 在人源的腫瘤細(xì)胞中OHSV2-MIL-15CFP具有更強(qiáng)的復(fù)制能力
    3.4 OHSV2-MIL-15CFP和OHSV2-HGM-CSF在體外感染腫瘤細(xì)胞后都能在MRNA水平上調(diào)腫瘤細(xì)胞的PD-L1 表達(dá)
    3.5 在CT26 小鼠模型上,OHSV2-MIL-15CFP能夠抑制腫瘤的生長并且延長小鼠的生存期
第4章 討論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3151177