發(fā)布時(shí)間：2021-04-21 05:45

　　目的川貝母（Fritillaria cirrhosa D.Don）作為藥食同源植物,不僅可以作為食品食用,也可以作為藥用目的。為了保證川貝母食用、藥用安全,對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制研究,進(jìn)一步為嚴(yán)格控制川貝母藥材質(zhì)量打下基礎(chǔ),從而保證食用安全。方法利用HPLC-ELSD檢測(cè)手段測(cè)定1-2年與3-4年野生川貝母藥材中的西貝母堿（Imperialine）、貝母素甲（Peimine）和貝母素乙（Peiminine）的含量,為川貝母生物堿代謝工程供給了材料揀選的依據(jù)。以從原產(chǎn)地康定折多山野生撫育基地采擷的野生川貝母藥材鱗莖為材料,利用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)克隆卷葉貝母HMGR基因（FcHMGR）的全長(zhǎng)cDNA和CAS基因（FcCAS）開(kāi)放閱讀框（open reading frame,ORF）序列,并基于在線工具對(duì)FcHMGR和FcCAS序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。通過(guò)熒光定量（qRT-PCR）手段檢測(cè)1-2年與3-4年野生鱗莖cDNA樣本中FcCAS和FcHMGR相對(duì)含量。此外,還利用原核表達(dá)體系對(duì)HMGR進(jìn)行了酶活測(cè)定。結(jié)果1不同年限（1-2年與3-4）年野生川貝母的生物堿含量數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),3-4年... 

【文章來(lái)源】：成都大學(xué)四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表（List of abbreviation）
摘要
Abstract
引言
第一章 基于生物活性物質(zhì)測(cè)定開(kāi)展川貝母質(zhì)量控制研究
    1 研究目的和意義
    2 研究?jī)?nèi)容
        2.1 試驗(yàn)儀器、試劑與材料
            2.1.1 儀器與試劑
            2.1.2 生物堿類對(duì)照品
            2.1.3 材料的準(zhǔn)備
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 對(duì)照品溶液制備
            2.2.2 供試品溶液制備
            2.2.3 色譜條件
        2.3 方法學(xué)考察
            2.3.1 線性關(guān)系考察
    3 結(jié)果與分析
        3.1 3-4 年野生川貝母藥材生物堿含量的測(cè)定
        3.2 1-2 年野生川貝母藥材生物堿含量的測(cè)定
        3.3 川貝母藥材中三種有效成分的含量測(cè)定結(jié)果
    4 小結(jié)
第二章 川貝母關(guān)鍵酶基因HMGR的克隆與表達(dá)
    1 研究目的和意義
    2 材料、儀器與試劑
        2.1 植物材料
        2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.3 菌株和載體
        2.4 試劑
        2.5 實(shí)驗(yàn)引物
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 卷葉貝母FcHMGR基因c DNA的合成
            3.1.1 卷葉貝母鱗莖總的RNA提取
            3.1.2 卷葉貝母FcHMGR基因c DNA的合成
            3.1.3 卷葉貝母FcHMGR基因c DNA全長(zhǎng)的獲得
        3.2 卷葉貝母FcHMGR基因的克隆及生物信息學(xué)分析
            3.2.1 PCR產(chǎn)物的回收與連接
            3.2.2 轉(zhuǎn)化
            3.2.3 陽(yáng)性克隆的篩選
            3.2.4 卷葉貝母FcHMGR基因生物信息學(xué)分析軟件
        3.3 卷葉貝母FcHMGR 基因的熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
            3.3.1 qRT-PCR引物的設(shè)計(jì)
            3.3.2 卷葉貝母FcHMGR基因cDNA的獲得
            3.3.3 PCR反應(yīng)步驟
        3.4 卷葉貝母FcHMGR基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
            3.4.1 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化與單克隆的培養(yǎng)
            3.4.2 陽(yáng)性單克隆的篩選
            3.4.3 質(zhì)粒的提取
        3.5 卷葉貝母FcHMGR基因原核表達(dá)載體的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.6 HMGR-pGEX酶活性的分析
            3.6.1 蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線
            3.6.2 HMGR-pGEX酶活性試劑的準(zhǔn)備
            3.6.3 酶活測(cè)定
    4 結(jié)果與分析
        4.1 川貝母鱗莖總RNA的質(zhì)量分析
        4.2 川貝母FcHMGR基因全長(zhǎng)c DNA的克隆
        4.3 FcHMGR基因生物信息學(xué)分析
            4.3.1 FcHMGR蛋白的分子量及等電點(diǎn)預(yù)測(cè)
            4.3.2 FcHMGR蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析
            4.3.3 蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)以及信號(hào)肽的預(yù)測(cè)
            4.3.4 氨基酸序列的同源性分析
            4.3.5 構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
            4.3.6 FcHMGR蛋白的二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        4.4 卷葉貝母FcHMGR基因的熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
        4.5 卷葉貝母FcHMGR基因原核表達(dá)的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.6 HMGR活性檢測(cè)
    5 小結(jié)
第三章 川貝母關(guān)鍵酶基因CAS的克隆與表達(dá)
    1 研究目的與意義
    2 材料、儀器與試劑
        2.1 植物材料
        2.2 試劑與儀器
        2.3 菌株和載體
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 卷葉貝母FcCAS基因cDNA全長(zhǎng)的獲得
            3.1.1 卷葉貝母的總RNA的提取與cDNA的合成
            3.1.2 卷葉貝母FcCAS基因的克隆
        3.2 卷葉貝母FcCAS基因序列分析
        3.3 卷葉貝母FcCAS基因的熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)方法
    4 結(jié)果與分析
        4.1 卷葉貝母FcCAS基因cDNA的獲得
            4.1.1 卷葉貝母鱗莖總RNA質(zhì)量檢測(cè)
            4.1.2 卷葉貝母FcCAS基因ORF的克隆
        4.2 FcCAS基因序列分析
            4.2.1 FcCAS基因編碼蛋白特性分析
            4.2.2 氨基酸序列比對(duì)和基因進(jìn)化分析
        4.3 FcCAS基因表達(dá)量的分析
    5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 附錄內(nèi)容名稱
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文及科研成果
致謝



本文編號(hào)：3151175