目的川貝母（Fritillaria cirrhosa D.Don）作為藥食同源植物,不僅可以作為食品食用,也可以作為藥用目的。為了保證川貝母食用、藥用安全,對其進行質量控制研究,進一步為嚴格控制川貝母藥材質量打下基礎,從而保證食用安全。方法利用HPLC-ELSD檢測手段測定1-2年與3-4年野生川貝母藥材中的西貝母堿（Imperialine）、貝母素甲（Peimine）和貝母素乙（Peiminine）的含量,為川貝母生物堿代謝工程供給了材料揀選的依據。以從原產地康定折多山野生撫育基地采擷的野生川貝母藥材鱗莖為材料,利用聚合酶鏈反應（PCR）技術克隆卷葉貝母HMGR基因（FcHMGR）的全長cDNA和CAS基因（FcCAS）開放閱讀框（open reading frame,ORF）序列,并基于在線工具對FcHMGR和FcCAS序列進行生物信息學分析。通過熒光定量（qRT-PCR）手段檢測1-2年與3-4年野生鱗莖cDNA樣本中FcCAS和FcHMGR相對含量。此外,還利用原核表達體系對HMGR進行了酶活測定。結果1不同年限（1-2年與3-4）年野生川貝母的生物堿含量數據分析發(fā)現,3-4年... 

【文章來源】：成都大學四川省

【文章頁數】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
Abstract
引言
第一章 基于生物活性物質測定開展川貝母質量控制研究
    1 研究目的和意義
    2 研究內容
        2.1 試驗儀器、試劑與材料
            2.1.1 儀器與試劑
            2.1.2 生物堿類對照品
            2.1.3 材料的準備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 對照品溶液制備
            2.2.2 供試品溶液制備
            2.2.3 色譜條件
        2.3 方法學考察
            2.3.1 線性關系考察
    3 結果與分析
        3.1 3-4 年野生川貝母藥材生物堿含量的測定
        3.2 1-2 年野生川貝母藥材生物堿含量的測定
        3.3 川貝母藥材中三種有效成分的含量測定結果
    4 小結
第二章 川貝母關鍵酶基因HMGR的克隆與表達
    1 研究目的和意義
    2 材料、儀器與試劑
        2.1 植物材料
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 菌株和載體
        2.4 試劑
        2.5 實驗引物
    3 實驗方法
        3.1 卷葉貝母FcHMGR基因c DNA的合成
            3.1.1 卷葉貝母鱗莖總的RNA提取
            3.1.2 卷葉貝母FcHMGR基因c DNA的合成
            3.1.3 卷葉貝母FcHMGR基因c DNA全長的獲得
        3.2 卷葉貝母FcHMGR基因的克隆及生物信息學分析
            3.2.1 PCR產物的回收與連接
            3.2.2 轉化
            3.2.3 陽性克隆的篩選
            3.2.4 卷葉貝母FcHMGR基因生物信息學分析軟件
        3.3 卷葉貝母FcHMGR 基因的熒光定量PCR實驗
            3.3.1 qRT-PCR引物的設計
            3.3.2 卷葉貝母FcHMGR基因cDNA的獲得
            3.3.3 PCR反應步驟
        3.4 卷葉貝母FcHMGR基因原核表達載體的構建
            3.4.1 連接產物的轉化與單克隆的培養(yǎng)
            3.4.2 陽性單克隆的篩選
            3.4.3 質粒的提取
        3.5 卷葉貝母FcHMGR基因原核表達載體的誘導表達
        3.6 HMGR-pGEX酶活性的分析
            3.6.1 蛋白含量標準曲線
            3.6.2 HMGR-pGEX酶活性試劑的準備
            3.6.3 酶活測定
    4 結果與分析
        4.1 川貝母鱗莖總RNA的質量分析
        4.2 川貝母FcHMGR基因全長c DNA的克隆
        4.3 FcHMGR基因生物信息學分析
            4.3.1 FcHMGR蛋白的分子量及等電點預測
            4.3.2 FcHMGR蛋白保守結構域分析
            4.3.3 蛋白質跨膜結構以及信號肽的預測
            4.3.4 氨基酸序列的同源性分析
            4.3.5 構建系統(tǒng)進化樹分析
            4.3.6 FcHMGR蛋白的二級、三級結構預測
        4.4 卷葉貝母FcHMGR基因的熒光定量PCR實驗
        4.5 卷葉貝母FcHMGR基因原核表達的誘導表達
        4.6 HMGR活性檢測
    5 小結
第三章 川貝母關鍵酶基因CAS的克隆與表達
    1 研究目的與意義
    2 材料、儀器與試劑
        2.1 植物材料
        2.2 試劑與儀器
        2.3 菌株和載體
    3 實驗方法
        3.1 卷葉貝母FcCAS基因cDNA全長的獲得
            3.1.1 卷葉貝母的總RNA的提取與cDNA的合成
            3.1.2 卷葉貝母FcCAS基因的克隆
        3.2 卷葉貝母FcCAS基因序列分析
        3.3 卷葉貝母FcCAS基因的熒光定量PCR實驗方法
    4 結果與分析
        4.1 卷葉貝母FcCAS基因cDNA的獲得
            4.1.1 卷葉貝母鱗莖總RNA質量檢測
            4.1.2 卷葉貝母FcCAS基因ORF的克隆
        4.2 FcCAS基因序列分析
            4.2.1 FcCAS基因編碼蛋白特性分析
            4.2.2 氨基酸序列比對和基因進化分析
        4.3 FcCAS基因表達量的分析
    5 小結
結論
參考文獻
附錄A 附錄內容名稱
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文及科研成果
致謝



本文編號：3151175