DNA甲基化對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育、器官分化等生物過(guò)程有著很重要的影響。研究通過(guò)構(gòu)建森林草莓DDM1基因（Decrease in DNA methylation1）RNA干擾（RNA interference, RNAi）載體,對(duì)該基因的功能進(jìn)行初步探究。以森林草莓的cDNA為模板克隆出基因正向片段DDM1-1和反向片段DDM1-2,然后將其分別連接到內(nèi)含子的干涉表達(dá)載體上,構(gòu)建RNAi表達(dá)載體;再通過(guò)凍融法將其轉(zhuǎn)入到根癌農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)細(xì)胞中,利用葉盤法進(jìn)行森林草莓遺傳轉(zhuǎn)化;最后通過(guò)Gus染色對(duì)陽(yáng)性苗進(jìn)行鑒定,然后對(duì)轉(zhuǎn)基因草莓植株進(jìn)行了表型觀察和FveDDM1基因表達(dá)量分析。結(jié)果顯示,與對(duì)照植株相比,轉(zhuǎn)基因植株FveDDM1基因的表達(dá)量降低,葉片出現(xiàn)了明顯的畸形,葉邊緣變窄,缺刻變深。研究結(jié)果可為進(jìn)一步探討DDM1基因的功能及甲基化對(duì)植物葉片生長(zhǎng)發(fā)育的影響提供一定的基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：生物學(xué)雜志. 2020,37(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 正向片段DDM1-1的片段的克隆和回收
        1.2.2 中間載體的構(gòu)建
        1.2.3 反向片段DDM1-2的擴(kuò)增和DDM1基因干涉表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.4 草莓外植體的制備
        1.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的森林草莓的遺傳轉(zhuǎn)化
        1.2.6 GUS染色
        1.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
2 結(jié)果與分析
    2.1 森林草莓FveDDM1基因正向片段DDM1-1擴(kuò)增
    2.2 中間載體的構(gòu)建
    2.3 FveDDM1基因反向片段DDM1-2擴(kuò)增和干涉載體的構(gòu)建
    2.4 轉(zhuǎn)基因草莓株系GUS染色鑒定
    2.5 轉(zhuǎn)基因草莓中甲基化修飾基因FveDDM1的表達(dá)分析
    2.6 轉(zhuǎn)基因草莓的表型分析
3 討論與結(jié)論



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