發(fā)布時間：2021-04-20 03:40

　　成纖維細胞生長因子（FGFs）對細胞的增殖、分化和凋亡起重要的調(diào)控作用,并廣泛參與組織發(fā)育和再生過程。成纖維生長因子13（FGF13）作為FGFs亞家族成員,近年來被發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤中表達上調(diào),但是在非小細胞肺癌（NSCLC）中的作用和分子機制還有待明確。本文主要探究了FGF13與SHCBP1對A549細胞增殖的影響及其分子調(diào)控機制。本研究發(fā)現(xiàn)FGF13在A549細胞中有較高的表達水平,表明FGF13可能參與A549細胞增殖過程。因此,分別采用CCK-8、平板克隆形成和細胞免疫熒光實驗進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn),下調(diào)FGF13的表達能夠顯著抑制A549細胞增殖,而超表達FGF13后結(jié)果與之相反。同時,下調(diào)FGF13的表達,Ki67蛋白的陽性率也會明顯降低。這些結(jié)果證實FGF13與A549細胞增殖密切相關(guān)。此外,FGF13的干擾導(dǎo)致A549細胞周期阻滯在G1/S期,相反超表達FGF13可以促進A549細胞周期G1/S期的轉(zhuǎn)換。通過檢測G1/S期相關(guān)蛋白,發(fā)現(xiàn)FGF13誘導(dǎo)的細胞周期阻滯與CyclinE、CDK2、P21和P27的表達有關(guān)。另一方面,FGF13可以通過激活A(yù)KT/gsk3α/gs... 

【文章來源】：陜西理工大學(xué)陜西省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 成纖維生長因子 13（FGF13）
        1.1.1 FGF13基因結(jié)構(gòu)
        1.1.2 FGF13的功能
    1.2 SHC SH2結(jié)構(gòu)域連接蛋白 1（SHCBP1）
        1.2.1 SHCBP1基因結(jié)構(gòu)
        1.2.2 SHCBP1表達與功能
    1.3 蛋白質(zhì)互作研究進展
    1.4 研究目的及意義
第2章 FGF13在A549細胞中生物學(xué)功能研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗對象
        2.1.2 試劑、耗材
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 實驗抗體
        2.1.6 實驗引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 轉(zhuǎn)錄水平檢測FGF13表達
        2.2.2 蛋白水平檢測FGF13的表達
        2.2.3 CCK-8 檢測A549細胞增殖能力
        2.2.4 平板克隆形成檢測A549細胞集落成群能力
        2.2.5 細胞免疫熒光染檢測Ki67蛋白的表達
        2.2.6 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 FGF13在A549細胞中高表達
        2.3.2 FGF13干擾和超表達效率檢測
        2.3.3 FGF13高表達促進A549細胞增殖
        2.3.4 平板克隆檢測A549細胞集落形成能力
        2.3.5 細胞免疫熒光檢測Ki67蛋白表達
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 FGF13調(diào)控A549細胞周期并激活A(yù)KT信號通路
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗細胞
        3.1.2 試劑、耗材
        3.1.3 試劑配制
        3.1.4 實驗抗體
        3.1.5 實驗儀器
        3.1.6 實驗引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 流式細胞術(shù)檢測細胞周期分布
        3.2.2 轉(zhuǎn)錄水平檢測細胞周期相關(guān)因子表達
        3.2.3 蛋白水平檢測AKT信號相關(guān)蛋白表達
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 FGF13影響A549細胞周期進程
        3.3.2 FGF13影響細胞周期相關(guān)因子表達水平
        3.3.3 FGF13激活A(yù)KT信號通路
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 FGF13與SHCBP1存在相互作用
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗細胞
        4.1.2 實驗試劑、耗材
        4.1.3 試劑配制
        4.1.4 實驗儀器
        4.1.5 實驗引物
        4.1.6 實驗抗體
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞免疫熒光染色
        4.2.2 FGF13標簽載體構(gòu)建及擴增
        4.2.3 SHCBP1標簽載體構(gòu)建及擴增
        4.2.4 蛋白質(zhì)免疫共沉淀（Co-IP）驗證FGF13與SHCBP1互作關(guān)系
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 FGF13在A549細胞中的定位情況
        4.3.2 SHCBP1在A549細胞中的定位情況
        4.3.3 FGF13和SHCBP1在A549細胞中存在共定位
        4.3.4 FGF13超表達標簽載體（pcNDA3.1-Flag -FGF13）構(gòu)建
        4.3.5 SHCBP1超表達標簽載體（pcNDA3.1-HA -SHCBP1）構(gòu)建
        4.3.6 FGF13與SHCBP1相互作用的驗證
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 FGF13與SHCBP1互作對A549細胞增殖的影響
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗細胞
        5.1.2 試劑、耗材
        5.1.3 試劑配制
        5.1.4 實驗抗體
        5.1.5 實驗儀器
        5.1.6 實驗引物
    5.2 實驗方法
        5.2.1 CCK-8 檢測A549細胞增殖能力
        5.2.2 細胞免疫熒光染檢測Ki67蛋白的表達
        5.2.3 轉(zhuǎn)錄水平檢測SHCBP1的表達
        5.2.4 蛋白免疫印跡（western blot）
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 SHCBP1超表達效率檢測
        5.3.2 超表達SHCBP1對A549細胞增殖的影響
        5.3.3 SHCBP1對Ki67蛋白表達的影響
        5.3.4 FGF13與SHCBP1相互作用調(diào)控A549細胞增殖
        5.3.5 FGF13與SHCBP1相互作用調(diào)控P21、P27和CyclinE1的表達
        5.3.6 FGF13與SHCBP1共同介導(dǎo)P21、P27和CyclinE1的表達
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄
    附錄Ⅰ 實驗試劑、耗材
    附錄Ⅱ 主要實驗儀器
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3148906