本研究基于RBM24基因調(diào)控干細胞向心肌細胞分化。利用CRISPR技術平臺,對小鼠基因組上的RBM24基因的1號外顯子進行特異性敲除,構建了 RBM24高效特異性敲除的干細胞系,結合相關生物信息學分析,對RBM24在心臟發(fā)生發(fā)育中的相關作用進行探究。本研究以RBM24基因為靶點,聯(lián)合CRISPR/Cas9技術與小鼠胚胎干細胞向心肌細胞分化的方法,建立研究基因缺陷型胚胎干細胞的模型與心肌細胞發(fā)育分化的相關分子機制的方法。主要目的包括:a.構建雙gRNA引導的CRIPSR-Cas9載體,并對其可行性以及檢測方法進行評定;b.采用CRIPSR-Cas9基因編輯技術,構建與心臟發(fā)育相關的RBM24基因敲除小鼠胚胎干細胞（mESC）穩(wěn)定細胞系;c.探究經(jīng)過電穿孔轉(zhuǎn)染與流式細胞儀分選后的RBM24基因敲除mESC系的細胞多能性是否受影響;d.探討RBM24基因敲除對mESC的擬胚體（EB）向心肌細胞分化的能力的影響。e.結合生物信息學,探討RBM24敲除后心臟相關基因發(fā)生的變化。在本文中,通過分子克隆技術構建針對敲除RBM24基因的1號外顯子的pX458M（pX459M）載體,并將 pX458M（... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１心臟發(fā)育的基因調(diào)控示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ．?１?Ａ?ｇｅｎｅｔｉｃ?ｂｌｕｅｐｒｉｎｔ?ｆｏｒ?ｈｅａｒｔ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．??２??

第一章前言??ＡＳ）產(chǎn)生多種ｍＲＮＡ。ＲＮＡ結合蛋白在這一過程中發(fā)揮重要的性蛋白Ｎｏｖａ包含三個ＫＨ域，可以通過識別內(nèi)含子ＹＣＡＹ（Ｙ表嘧啶Ｕ）序列控制一些ｍＲＮＡ?（如：ＪＮＫ２，ｎｅｏｇｅｎｉｎ等）的可變主要參與調(diào)節(jié)維持神經(jīng)元的可塑性。在自身免疫性副神經(jīng)疾�。ǎ危铮觯岬鞍自谏窠�(jīng)系統(tǒng)中減少，會出現(xiàn)過度運動的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。??ａ?ｌ二。一！■（＿＇??

第一章前言??１．３．２．１?ＲＢＭ２４基因的結構??ＲＢＭ２４也被稱為Ｓｅｂ－４、ＲＮＰＣ－６，位于小鼠第１３號染色體上，ＲＢＭ２４含??有４個外顯子，其編碼的蛋白含有２３６個氨基酸，大小為２４．７ｋＤ，ＮＣＢＩ最新??編號為＞＾＿００００７９．６（４６４１８１７６．．４６４３１０９９）。１１８１＾２４蛋白在小鼠和人中的同源性??高達９７．８％，在非洲爪蟾和斑馬魚中也分別達到了?８９％以及８３％１１。我們通過蛋??白的序列比對聚類分析得知，在大部分物種中ＲＢＭ２４的ＲＲＭ結構域相對較為??保守，不同物種之間表達的ＲＢＭ２４蛋白具有很高的同源性。在ＥＮＣＯＤＥ計劃??中對成年小鼠的不同器官的ＲＢＭ２４表達譜進行了定量，在心臟組織中ＲＢＭ２４??的表達量最高，如圖。??


本文編號：3146955