肺癌已成為對(duì)人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率越來越高,五年生存率僅為16%[1]。而肺癌轉(zhuǎn)移（主要是腦轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移）是導(dǎo)致肺癌病人死亡的主要原因。近年研究揭示,肺癌是一種多基因異常的惡性腫瘤。多種癌基因的異常激活、抑癌基因的失活、及多個(gè)原癌基因過表達(dá),在肺癌起始和轉(zhuǎn)移中起著重要作用[2-4]。然而,為何在肺癌中會(huì)有如此多的癌基因異常高表達(dá)?如何有效地抑制肺癌病人中癌基因高表達(dá),已成為亟需解決的關(guān)鍵科學(xué)問題。近年來,我們對(duì)肺癌中癌基因高表達(dá)的機(jī)制進(jìn)行了研究。雖然人們對(duì)細(xì)胞內(nèi)由啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄激活物、及RNA聚合酶II（Pol II）組成的復(fù)合體（基因轉(zhuǎn)錄機(jī)器,transcriptional machinery）已有了大量的研究,但是對(duì)肺癌中基因轉(zhuǎn)錄機(jī)器的激活和產(chǎn)生多種癌基因的機(jī)理知之甚少。我們發(fā)現(xiàn)CT45A1能夠誘導(dǎo)500多基因在乳腺癌細(xì)胞高表達(dá),使低致瘤性的乳腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT和惡性進(jìn)化,增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的干性,導(dǎo)致乳腺癌侵襲和肺轉(zhuǎn)移,提出了癌睪抗原CT45A1作為一個(gè)新的原癌基因,促進(jìn)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的新概念,但其作用機(jī)制并不清楚[5]。我們通過生物信息學(xué)分析揭示,C... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１、肺癌進(jìn)化的分期與腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)近年來，以癌基因?yàn)榘袠?biāo)的肺癌靶向治療取得了很大進(jìn)展，人們?cè)谕┗虬邢蛑委熌軌虼蟠筇岣叻伟┋熜�，但從總體上看上述癌基因和ERK、AKT、STATs

CT45A1 與 c-kit 啟動(dòng)子的活性區(qū)域結(jié)合，上調(diào) C-kit 啟動(dòng)子活性kit基因的啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)前 200bp（-200bp）以內(nèi)，這一區(qū)域也是子激活位點(diǎn)的富集區(qū)域（圖 9A）。我們將 c-kit啟動(dòng)子活性區(qū)域（-1至-183, K1）以及在 K1上游約 200bp（-212至-463，命名為 K2）兩個(gè)片段克隆到素酶報(bào)告基因載體 PGL4.17中，并且通過 lip2000轉(zhuǎn)染系統(tǒng)轉(zhuǎn)染至肺癌細(xì)-D中，通過化學(xué)發(fā)光法對(duì)其啟動(dòng)子活性進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示， K1片段強(qiáng)的啟動(dòng)子活性，而 K2片段活性很低（圖 9B）。接著，我們用斑點(diǎn)雜交（dot的方法對(duì)這一假設(shè)進(jìn)行了驗(yàn)證。將 K1，K2片段點(diǎn)在尼龍膜上，用 CT45A1蛋白與之結(jié)合后，加入 CT45A1特異性兔多抗顯影檢測結(jié)合情況。結(jié)果顯示，與 K1片段與有很強(qiáng)的結(jié)合，與 K2片段結(jié)合較弱（圖 9C），而與陰性對(duì)照 DNA不能結(jié)合，表明 CT45A1能夠直接結(jié)合到 c-kit啟動(dòng)子的 K1活性區(qū)域。200B

結(jié) 果 原癌基因 CT45A1 作為新的基因轉(zhuǎn)錄激活物促進(jìn)肺癌生長和轉(zhuǎn)移5、CT45A1 與 RNA 聚合酶 II(Pol II)相互作用一個(gè)基因作為轉(zhuǎn)錄激活物，它能與DNA結(jié)合，能與轉(zhuǎn)錄因子及RNA聚合酶II(Pol)相互作用。我們已經(jīng)用多種方法證明了 CT45A1能與 DNA結(jié)合，與 SP1等關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。那么，它是否能夠與 RNA聚合酶 II(PolII)相互作用呢？我們行了以下的探索。首先，我們通過免疫熒光探究了 CT45A1與 PolII在細(xì)胞內(nèi)位上的聯(lián)系。結(jié)果顯示，CT45A1定位于細(xì)胞核內(nèi)，PolII也是大部分定位于細(xì)核中，他們?cè)谖锢矶ㄎ簧嫌邢嚓P(guān)性，提示它們之間可能存在相互作用（圖 11A）。次，我們通過體外的結(jié)合實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，它們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上具有相互作用的可能（圖 11B）。最后，我們通過細(xì)胞內(nèi)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)存在相作用（圖 11C）。A B


本文編號(hào)：3142417