防御假單胞菌SN15-2是從番茄根際土壤分離得到的一株具有巨大生防潛力的植物根際促生菌,前期的研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)番茄青枯病等多種植物病害都有較好的防治作用。防御假單胞菌它要通過(guò)根際定殖,產(chǎn)生多種抗生素及次級(jí)代謝產(chǎn)物,分泌噬鐵素以及誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性等機(jī)制拮抗植物病原菌,但是其抵御外界不良環(huán)境的能力較弱,因而在制劑加工過(guò)程中損耗較大且極易失活。因此研究與菌株生防和抗逆相關(guān)的基因及途徑對(duì)防御假單胞菌的實(shí)際應(yīng)用至關(guān)重要。鑒于SN15-2在防治植物病害時(shí)具有強(qiáng)大的根際定殖能力,而菌株的運(yùn)動(dòng)性與植物根際定殖能力密切相關(guān),因此我們通過(guò)構(gòu)建基因kinB的缺失株ΔkinB,采用運(yùn)動(dòng)性平板、生物膜檢測(cè)、透射電鏡觀察、拮抗平板實(shí)驗(yàn)以及毛細(xì)管趨化試驗(yàn)分別檢測(cè)野生株與突變株的運(yùn)動(dòng)（涌動(dòng)和群集）能力、生物膜形成能力、鞭毛形成、對(duì)植物病原菌的拮抗能力以及對(duì)植株根莖葉的趨化能力。結(jié)果表明防御假單胞菌SN15-2內(nèi)kinB基因的缺失提高了細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力,涌動(dòng)和群集直徑分別增加了 10.3和9.6mm;損害了菌株形成生物膜的能力,對(duì)菌株的鞭毛位置和數(shù)目以及對(duì)病原菌的拮抗能力無(wú)顯著的影響;提高了菌株對(duì)根莖葉的趨化能力,尤其是對(duì)根... 

【文章來(lái)源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１同源雙交換示意圖??Ｆｉｇ．?２．１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ??

華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文?第１７頁(yè)??和菌體電泳驗(yàn)證篩選陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，如圖２．２?（Ｂ）所示。取電泳條帶大小正確的菌株，進(jìn)??行提質(zhì)粒、測(cè)序。測(cè)序成功的菌株即可轉(zhuǎn)入到防御假單胞菌感受態(tài)細(xì)胞中，構(gòu)建敲除菌。??Ｍ?１?２?Ｍ?１?２?Ｍ?１?２??ＨＨｈ??－：；／?；?｜ｅ．．．?＾?？??〇〇ｂｐ??（１）?（２）?（３）??圖２．２?（Ａ）?基因Ａ７ｗｆｉ、Ａ冰４、Ａｗｆｉ上下同源臂擴(kuò)增??Ｆｉｇ．?２．２?（Ａ）?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ａｎｄ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ｇｅｎｅ?ｋｉｎＢ＾?ｈｅｔＡ、ｂｅｔＢ??注：Ｍ?為?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；?（１）：基因?（２）：基因?（３）：基因??泳道１為擴(kuò)增上游同源臂？，泳道２為擴(kuò)增下游同源臂。??Ｎｏｔｅ：?Ｍ?ｓｔａｎｄｓ?ｆｏｒ?ＤＬ２０００?ｍａｋｅｒ；?（１）?ｇｅｎｅ?ｋｉｎＢ?；?（?２）?ｇｅｎｅ?ｂｅｔＡ＼?（?３?）?ｇｅｎｅ?ｂｅｔＢ．?Ｌａｎｄ?ｉｓ?ｔｈｅ??ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ；?ｌａｎｅ２?ｉｓ?ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ．??Ｍ?１?２?３?Ｍ?１?２?３?Ｍ?Ｉ?２?３??ｉ（）（？（）ｌ＾ｐ？；．ｒ＾?．?Ｉ?；ＶＰ＇ｊ?＾??ｓ＾Ｈ??（１）?（２）?⑶??圖２．２（Ｂ）?敲除質(zhì)粒構(gòu)建??Ｆｉｇ．?２．２?（Ｂ）?Ｔｈｅ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｗｉｔｈ?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ａｒｍｓ??注？？?Ｍ為ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；⑴細(xì)忍的敲除

華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文?第１７頁(yè)??和菌體電泳驗(yàn)證篩選陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，如圖２．２?（Ｂ）所示。取電泳條帶大小正確的菌株，進(jìn)??行提質(zhì)粒、測(cè)序。測(cè)序成功的菌株即可轉(zhuǎn)入到防御假單胞菌感受態(tài)細(xì)胞中，構(gòu)建敲除菌。??Ｍ?１?２?Ｍ?１?２?Ｍ?１?２??ＨＨｈ??－：；／?；?｜ｅ．．．?＾?？??〇〇ｂｐ??（１）?（２）?（３）??圖２．２?（Ａ）?基因Ａ７ｗｆｉ、Ａ冰４、Ａｗｆｉ上下同源臂擴(kuò)增??Ｆｉｇ．?２．２?（Ａ）?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ａｎｄ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ｇｅｎｅ?ｋｉｎＢ＾?ｈｅｔＡ、ｂｅｔＢ??注：Ｍ?為?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；?（１）：基因?（２）：基因?（３）：基因??泳道１為擴(kuò)增上游同源臂？，泳道２為擴(kuò)增下游同源臂。??Ｎｏｔｅ：?Ｍ?ｓｔａｎｄｓ?ｆｏｒ?ＤＬ２０００?ｍａｋｅｒ；?（１）?ｇｅｎｅ?ｋｉｎＢ?；?（?２）?ｇｅｎｅ?ｂｅｔＡ＼?（?３?）?ｇｅｎｅ?ｂｅｔＢ．?Ｌａｎｄ?ｉｓ?ｔｈｅ??ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｕｐｓｔｒｅａｍ；?ｌａｎｅ２?ｉｓ?ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ．??Ｍ?１?２?３?Ｍ?１?２?３?Ｍ?Ｉ?２?３??ｉ（）（？（）ｌ＾ｐ？；．ｒ＾?．?Ｉ?；ＶＰ＇ｊ?＾??ｓ＾Ｈ??（１）?（２）?⑶??圖２．２（Ｂ）?敲除質(zhì)粒構(gòu)建??Ｆｉｇ．?２．２?（Ｂ）?Ｔｈｅ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｗｉｔｈ?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ａｒｍｓ??注？？?Ｍ為ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；⑴細(xì)忍的敲除


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