小麥赤霉病是在全球范圍內(nèi)普遍存在的一種病害,它能夠引起小麥減產(chǎn)和品質(zhì)下降。引起小麥赤霉病的主要病原菌是禾谷鐮刀菌,其產(chǎn)生的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）對人畜的健康有巨大的威脅。DON毒素的合成受物理、化學和生物大分子等因素的影響。Rab7對DON毒素合成有影響,Rab7的功能執(zhí)行需要上游調(diào)節(jié)因子和下游效應(yīng)因子的作用。在哺乳動物中,Rabring7是Rab7的效應(yīng)因子,但Rabring7在禾谷鐮刀菌中的功能未知。本研究分析了Rabring7與FgRab7的相互作用,明確了禾谷鐮刀菌Rabring7的功能,主要研究結(jié)果如下:通過同源比對,在禾谷鐮刀菌數(shù)據(jù)庫中我們找到2個與Rabring7同源的基因:FGSG-00316和FGSG-01047。生物信息學分析顯示,FGSG-00316蛋白含有RING-H2結(jié)構(gòu)域,亞細胞定位在質(zhì)膜中;FGSG-01047蛋白含有RING U-box結(jié)構(gòu)域,亞細胞定位在細胞核中。首先,我們利用酵母雙雜交技術(shù)研究了Rabring7與FgRab7的相互作用情況,結(jié)果顯示,FGSG-00316、FGSG-01047與FgRab7原始態(tài)、激活態(tài)Rab7-CA和Rab7-... 

【文章來源】：河南工業(yè)大學河南省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

pGADT7載體圖譜

95℃ 45s8 循環(huán) 退火溫度 2min72℃ 延伸時間95℃ 45s25 循環(huán) 退火溫度 45s72℃ 延伸時間72℃ 10min）將 pGBKT7 質(zhì)粒（如圖 2 為 pGBKT7 的載體圖譜）和目的片段用 Nd酶同時進行雙酶切，在 37℃水浴鍋中酶切 4h 后將酶切后的質(zhì)粒和目的片）連接、轉(zhuǎn)化、驗證的操作同融合載體一樣，驗證正確后測序，保存測可。

00316OEF CCCAATCTTCAAACTCGAGATGAAATCCTCAACGATACCT 53℃00316COR GCCCTTGCTCACCATAAGCTTGATCGTCAGGAGATGACC 51℃01047OEF AACCCAATCTTCAAACTCGAGATGCTGCCTGGGTCAGTAT 53℃01047COR GCCCTTGCTCACCATAAGCTTGATATTGTCGCTAATTCCGCT 55℃P-Hind3-F CCCAAGCTTATGGTGAGCAAGGGCGAG 59℃P-BamHI-R CGGGATCCTTACTTGTACAGCTCGTCCA 59℃27-KpnI-F CGGGGTACCGCCAGGGTTTTCCCAGTCA 55℃27-XhoI-R CCGCTCGAGTTTGAAGATTGGGTTCCTACG 55℃性化克隆載體的制備：過表達載體 PKNT-RP27-GFP 圖譜如圖 3 所示。用 制性內(nèi)切酶酶切使環(huán)狀載體線性化。酶切體系由 HindIII 1μL、XhoI 1μL-RP27-GFP 質(zhì)粒 1μg、10×NE Buffer（CutSmart）5μL，加無菌水補足至 50μ切 4 小時，純化。


本文編號：3141596