研究背景:現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化所導(dǎo)致的心腦血管疾病及周?chē)芗膊“l(fā)病率逐年增高,在國(guó)人死亡原因排第一位,人們一直在探索動(dòng)脈硬化的致病機(jī)理,尋求解決動(dòng)脈硬化性疾病的有效方法。目前,隨著介入技術(shù)的進(jìn)步,新器材的出現(xiàn),腔內(nèi)手術(shù)治療動(dòng)脈硬化閉塞性疾病越來(lái)越多,但術(shù)后中遠(yuǎn)期動(dòng)脈再狹窄一直是無(wú)法徹底解決的難題。無(wú)論是動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展過(guò)程中,還是動(dòng)脈介入或手術(shù)后再狹窄的過(guò)程中,血管平滑肌細(xì)胞的增生和遷移均扮演著重要角色。資料顯示,脂肪分化相關(guān)蛋白在單核-巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞向泡沫細(xì)胞分化的過(guò)程中起著重要作用,進(jìn)而影響著動(dòng)脈粥樣硬化的形成。據(jù)現(xiàn)有資料顯示,目前尚缺乏ADRP基因敲除的VSMCs在體外培養(yǎng)血小板源性生長(zhǎng)因子刺激下增殖與分化的相關(guān)研究;另外,也缺少ADRP基因敲除對(duì)在動(dòng)物或人體內(nèi)血管內(nèi)膜增生的影響的相關(guān)研究。研究目的:確定ADRP基因敲除對(duì)體外培養(yǎng)的VSMCs的增殖、分化、遷移能力的影響;探索ADRP對(duì)內(nèi)膜增生和VSMC產(chǎn)生影響的分子機(jī)制;通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)確定ADRP基因敲除對(duì)小鼠體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化形成及內(nèi)膜增生的影響;通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)確定ADRP基因敲除對(duì)大鼠體內(nèi)動(dòng)脈球囊損傷后動(dòng)脈內(nèi)膜增生的影響。... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

1siADRP/siCtr轉(zhuǎn)染VSMCs24小時(shí)后，加入10ng/LPDGF，48h后westernblotting檢測(cè)ADRP蛋白的表達(dá)，β-actin作為內(nèi)部控制.*P<0.05，**P<0.01，下同

2.3.2 siADRP/siCtr 轉(zhuǎn)染 VSMCs24 小時(shí)后，加入 10 ng/L PDGF，于第 24h、48h 和 72h別行 MTT 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生存能力。檢測(cè)吸光度 490nmOD 值。人 VSMCs 進(jìn)行 siCtr/siADRP 轉(zhuǎn)染，或未轉(zhuǎn)染，均加入 10 ng/ml PDGF，通 MTT 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其生存能力。于 24h，48h 及 72h 時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果（見(jiàn)圖.3.2）表明，與對(duì)照組相比，PDGF 會(huì)刺激 VSMCs 增生，ADRP 敲除顯著的抑了 PDGF 所誘導(dǎo)的 VSMCs 增殖。比較 PDGF+siADRP 組和 PDGF+siCtr 組，DRP 敲除可明顯抑制 PDGF 所誘導(dǎo)的 VSMCs 增殖。本研究還分析了 VSMCs 的細(xì)胞周期分布(見(jiàn)表 2.3.1 及圖 2.3.3）。數(shù)據(jù)顯示DGF 組 G1 期細(xì)胞所占比例明顯低于對(duì)照組，而 S 期細(xì)胞所占比例明顯高于對(duì)31

2.3.3 siADRP/siCtr 轉(zhuǎn)染 VSMCs24h 后加入 PDGF 孵育 48 小時(shí)后進(jìn)行流siADRP/siCtr 轉(zhuǎn)染 VSMCs24 小時(shí)后，加入 10 ng/L PDGF，繼標(biāo)本，應(yīng)用 western blotting 檢查增生標(biāo)準(zhǔn)物 PCNA 表達(dá)情況（DGF 組 PCNA 表達(dá)明顯高于對(duì)照組，而 PDGF+siADRP 組與 P示 ADRP 敲除可明顯抑制 PDGF 誘導(dǎo)的 PCNA 蛋白增殖。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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