目的探討微小RNA-135a-5p（miR-135a-5p）通過(guò)調(diào)控SMAD家庭成員4（Smad4）表達(dá)而調(diào)控多囊卵巢綜合征卵巢顆粒細(xì)胞的增殖及凋亡。方法體外培養(yǎng)人卵巢顆粒細(xì)胞KGN與人正常卵巢上皮細(xì)胞IOSE80,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）與蛋白免疫印跡法（Western blot）分別檢測(cè)miR-135a-5p、Smad4的表達(dá)量;分別用anti-miR-con、anti-miR-135a-5p、anti-miR-135a-5p與si-con、anti-miR-135a-5p與si-Smad4轉(zhuǎn)染至卵巢顆粒細(xì)胞;甲基噻唑基四唑法（MTT）檢測(cè)細(xì)胞增殖;平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-135a-5p對(duì)野生型和突變型Smad4熒光素酶活性的影響;Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、細(xì)胞周期依賴蛋白激酶2（CDK2）、B淋巴細(xì)胞瘤-2相關(guān)蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase-3）、B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）的表達(dá)量。結(jié)果與正... 

【文章來(lái)源】：熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2020,20(07)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

Western blot檢測(cè)人卵巢顆粒細(xì)胞和人正常卵巢上皮細(xì)胞中Smad4的表達(dá)

與anti-miR-con組比較，anti-miR-135a-5p組細(xì)胞活力顯著降低，克隆形成數(shù)顯著減少，Cyclin D1、CDK2蛋白水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)圖2和表2。2.3 干擾miR-135a-5p促進(jìn)人卵巢顆粒細(xì)胞KGN凋亡

starBase預(yù)測(cè)顯示miR-135a-5p與Smad4存在靶向結(jié)合位點(diǎn)，見(jiàn)圖4A。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，共轉(zhuǎn)染野生型載體WT-Smad4的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，與miR-con組比較，miR-135a-5p組熒光素酶活性顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；共轉(zhuǎn)染突變型載體MUT-Smad4的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，miR-135a-5p組熒光素酶活性與miR-con組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表4。與miR-con組比較，miR-135a-5p組細(xì)胞中Smad4蛋白水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與anti-miR-con組比較，anti-miR-135a-5p組細(xì)胞中Smad4蛋白水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)圖4B和表5。圖4 miR-135a-5p與Smad4存在互補(bǔ)序列

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-1291通過(guò)調(diào)控鋅指蛋白8基因的表達(dá)對(duì)腎癌細(xì)胞周期及增殖的影響[J]. 葉志華,黃耿,付金倫,桂定文.  國(guó)際腫瘤學(xué)雜志. 2018 (03)



本文編號(hào)：3136467