對于包括絕大多數(shù)魚類、兩棲爬行類和鳥類在內(nèi)的卵生動物,卵黃發(fā)生是卵子發(fā)生過程中的關(guān)鍵階段之一。在卵黃發(fā)生中,卵子將積累大量的卵黃蛋白（yolk proteins,YPs）,為早期胚胎體外發(fā)育提供能量和營養(yǎng)來源。YPs是卵黃蛋白原（vitellogenin,Vtg）通過卵黃蛋白原受體（vitellogenin receptor,VtgR）進(jìn)入卵母細(xì)胞后積累的產(chǎn)物。YPs的前體Vtg通過何種VtgR進(jìn)入卵母細(xì)胞一直是研究的熱點。然而到目前為止,脊椎動物的VtgR還未完全確定,缺少直接的功能證據(jù)。在本研究中,我們以斑馬魚（Danio rerio）為動物模型,針對VtgR展開了系統(tǒng)性的鑒定和分析。（1）利用卵黃脂磷蛋白（lipovitellin,Lv）抗體,通過Western blotting和熒光免疫組化證實了在斑馬魚中卵黃發(fā)生過程依賴于Vtg的攝入。（2）已有證據(jù)表明VtgR基因?qū)儆诘兔芏戎鞍资荏w（low-density lipoprotein receptor,LDLR）家族,為鑒定何種VtgR介導(dǎo)Vtg的攝入,針對目前所有斑馬魚的LDLR家族成員基因,根據(jù)在卵巢中表達(dá)量的高低進(jìn)行了篩... 

【文章來源】：西北師范大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

硬骨魚類卵黃發(fā)生過程圖（參考AkihikoHara（2016），BJReading（2017），CraigVincentSullivan（2018）所畫）

有許多優(yōu)勢[93]，其個體體型小，養(yǎng)殖成本較低。此外，其世代周期短，胚胎在2-3天就可以發(fā)育成幼魚苗，孵出后的幼魚苗經(jīng)約3個月左右的時間就可達(dá)到繁殖條件，成年雌斑馬魚通常每周能產(chǎn)200-300個卵。而且其基因組序列和人類的相似度達(dá)到70%以上[94]。斑馬魚正式因為這些優(yōu)勢，很快成為生命科學(xué)研究諸多領(lǐng)域的模式生物之一[95,96]。斑馬魚是體外受精，受精后0-4天（dayspost-fertilization，dpf）稱為胚胎期，5-15dpf稱為幼苗期，16-90dpf稱為幼魚期，>90dpf稱為成年期。斑馬魚的卵巢是異步卵巢，包含各個時期的卵泡。如圖1-2所示，在斑馬魚卵母細(xì)胞發(fā)育過程中，根據(jù)形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)和生理生化特性，將其分為以下幾個階段:早期生長期（primarygrowthstage，PG，<100μm）、卵黃生成前期（previtellogenic，PV，100-230μm）、卵黃生成早期（earlyvitellogenic，EV，230-330μm）、卵黃生成中期（midvitellogenic，MV，330-430μm）、完全生長期（fullygrown，F(xiàn)G，>650μm）和成熟期（maturation，M）期[97]。與其他的魚類類似，斑馬魚的卵泡由內(nèi)部的卵母細(xì)胞（oocyte）和外圍的濾泡細(xì)胞（follicularcell）組成，濾泡細(xì)胞則由外側(cè)的鞘膜細(xì)胞層和內(nèi)測的顆粒細(xì)胞層組成。圖1-2斑馬魚卵母細(xì)胞不同發(fā)育時期示意圖PG：早期生長期；PV：卵黃生成前期；EV：卵黃生成早期；MV：卵黃生成中期；

文獻(xiàn)綜述15圖1-3ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9、基于CRISPR/Cas9的單基因四位點敲除等靶向基因敲除技術(shù)說明及斑馬魚靶向基因敲除工作流程說明Fig1-3IllustrationoftargetedgeneknockouttechniquesincludingZFN,TALEN,CRISPR/Cas9,fourlocusknockoutofasinglegenebasedonCRISPR/Cas9andworkflowfortargetedgeneknockoutinzebrafish1.5研究目的YPs對胚胎及幼魚早期的生長發(fā)育有著至關(guān)重要的作用，YPs的前體Vtg通過何種VtgR進(jìn)入卵母細(xì)胞一直是研究的熱點。在許多魚類、兩棲類和鳥類在內(nèi)的脊椎動物以及在無脊椎動物中，已經(jīng)有不少關(guān)于VtgR基因的分子特征和表達(dá)等方面的研究，但是針對VtgR基因的功能研究，只在無脊椎動物中有研究，而且脊椎動物VtgR還未完全確定，更缺少直接的功能證據(jù)。針對VtgR，本研究以斑馬魚為實驗?zāi)Ｐ停到y(tǒng)性的鑒定和分析VtgR，斑馬魚中VtgR的確定將助于對魚類卵黃發(fā)生分子機(jī)理的理解，更將推進(jìn)魚類卵子的體外培養(yǎng)和重建的研究。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]國家斑馬魚資源中心的資源、技術(shù)和服務(wù)建設(shè)[J]. 熊鳳,謝訓(xùn)衛(wèi),潘魯媛,李闊宇,柳力月,張昀,李玲璐,孫永華.  遺傳. 2018(08)
[2]利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)建立斑馬魚Spag6基因敲除模型[J]. 張世陽,張志兵,鎮(zhèn)景開,Megan Hept,李為,James A.Lister,張玲,曾婧.  華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2018(02)
[3]中國斑馬魚研究發(fā)展歷程及現(xiàn)狀[J]. 賈順姬,孟安明.  遺傳. 2012(09)



本文編號：3133897