目的建立穩(wěn)定表達(dá)人表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）啟動(dòng)子及螢光素酶（Luc）報(bào)告基因的三陰性乳腺癌細(xì)胞系,并對(duì)其應(yīng)用進(jìn)行初步驗(yàn)證。方法采用基因重組技術(shù),構(gòu)建含有EGFR啟動(dòng)子以及Luc報(bào)告基因的慢病毒載體,并感染MDA-MB231細(xì)胞,經(jīng)過(guò)嘌呤霉素篩選獲得能穩(wěn)定表達(dá)Luc活性的MDA-MB231-EGFR-Luc2細(xì)胞系;分別采用EGFR激活劑EGF以及抑制劑吉非替尼處理細(xì)胞后檢測(cè)Luc活性變化。結(jié)果通過(guò)基因測(cè)序和質(zhì)粒雙酶切鑒定, EGFR基因啟動(dòng)子Luc報(bào)告基因-慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建成功,經(jīng)過(guò)嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)Luc的MDA-MB231-EGFR-Luc2細(xì)胞; EGF可劑量依賴(lài)性的增加細(xì)胞中Luc的活性,而吉非替尼則相反。結(jié)論建立了MDA-MB231-EGFR-Luc2穩(wěn)定表達(dá)EGFR啟動(dòng)子及Luc報(bào)告基因細(xì)胞系,為高通量篩選靶向EGFR的抗腫瘤藥物提供一類(lèi)新的細(xì)胞模型。 

【文章來(lái)源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2020,36(10)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒EGFR-promoter-Luc2質(zhì)粒雙酶切電泳圖

采用puro連續(xù)篩選1周后, 獲得MDA-MB231-EGFR-Luc2細(xì)胞系, 熒光顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞表達(dá)GFP, 轉(zhuǎn)染率在90%以上(圖2A)。Luc發(fā)光信號(hào)值測(cè)定結(jié)果表明, MDA-MB231-EGFR-Luc2細(xì)胞的Luc活性是MDA-MB231細(xì)胞的41.8倍(圖2B), 表明人EGFR啟動(dòng)子Luc報(bào)告基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系建立成功。2.3 EGF處理增強(qiáng)MDA-MB231-EGFR-Luc2細(xì)胞Luc活性, 吉非替尼處理則相反

MDA-MB231-EGFR-Luc2細(xì)胞經(jīng)EGF、 吉非替尼處理后, Luc活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn), 隨著EGF劑量的升高, 細(xì)胞Luc活性增加, 其中20 ng/mL的EGF可使Luc活性上升1.27倍; 而加入不同濃度吉非替尼則能明顯降低細(xì)胞Luc的活性, 在80 μmol/L的吉非替尼作用下, 細(xì)胞Luc活性下降約20%(圖3)。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
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