目的:以拉布拉多犬及金毛尋回獵犬為研究對象,檢測已被報道的與髖關節(jié)發(fā)育不良具有顯著關聯(lián)性的8個基因上的15個SNP位點,驗證其關聯(lián)性,以期找到能夠作為淘汰髖關節(jié)發(fā)育不良的拉布拉多犬及金毛尋回獵犬的遺傳學標記。方法:1.影像學診斷,對實驗犬（CHD犬25只,健康犬30只）的髖關節(jié)部位進行X光照射及影像學診斷,采用主觀髖關節(jié)打分（OFA技術）與Norberg角衡量相結合的診斷方法評估犬的髖關節(jié)發(fā)育狀況。2.血液樣本的獲取,征集CHD拉布拉多犬及金毛獵犬的信息,通過前肢靜脈采血的方式獲取血液樣本。3.犬基因組DNA的提取,采用Blood Genome DNA Extraction Kit試劑盒提取。4.SNP位點DNA片段的獲取及驗證,查閱文獻獲取候選基因SNP位點,針對這些位點進行引物設計,完成PCR擴增、測序及SNP位點分型分析。結果:1.COL6A3基因CFA25:51040259位點與拉布拉多犬的CHD具有顯著關聯(lián)性（P=0.013）,CHD拉布拉多犬的A型等位基因頻率顯著偏高（P=0.006）。FN1基因CFA37:25095511位點與拉布拉多犬的CHD具有極顯著關聯(lián)性（P=0.... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CHD犬與健康犬的髖關節(jié)X光影像圖

大連醫(yī)科大學碩士學位論文PCR 循環(huán)：94℃ 1 min，60℃ 1 min，72℃ 1 min，循環(huán) 35 次；延伸 72℃取擴增產(chǎn)物 20 μl 與 6×Loading Buffer 以 5: 1 的比例均勻混合，在已的 1.5%的瓊脂糖凝膠上電泳，電泳結束后，在成像儀上拍照。3.4.4. 測序及 SNP 位點分型將經(jīng)過驗證的 PCR 擴增片段委托寶生物（大連）生物技術有限公司通過測序數(shù)據(jù)的分析，確認候選基因 SNP 位點的基因型多態(tài)性分布。SN基因型多態(tài)性測序結果如圖 2 所示。

大連醫(yī)科大學碩士學位論文位點 rs3744539 與犬的 SNP 位點 rs851998705 間隔 196 個堿基，但兩個 SNP上下游序列高度重合，rs3744539 位點為錯義突變，突變堿基為 G—A/C，引基酸變化為 Asp Asn/His，rs851998705 位點同為錯義突變，突變堿基為 G—引起氨基酸變化為 Arg His。因而選擇 rs851998705 為候選基因位點進行檢析。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]唾液應激生理指標研究進展[J]. 劉林林,蘇文君,蔣春雷.  臨床軍醫(yī)雜志. 2017(11)
[2]DLX3基因罕見變異與發(fā)育性髖關節(jié)發(fā)育不良[J]. 張薇,田維,王彬彬.  中國計劃生育學雜志. 2017(07)
[3]腦電信號處理系統(tǒng)的現(xiàn)狀及發(fā)展[J]. 鄭婷婷.  山東工業(yè)技術. 2017(09)
[4]距離測試中拉布拉多犬行為及心率變化對導盲犬培訓成功率的影響[J]. 李雅嬋,雒東,韓芳,王亮,詹紅微,王福金,王愛國,陳大朋,周子娟,王靖宇.  中國實驗動物學報. 2017(01)
[5]應激生理指標皮質(zhì)醇和α-淀粉酶的研究進展[J]. 張懿,蘇文君,蔣春雷.  軍事醫(yī)學. 2017(02)
[6]恐懼性測試中導盲犬心率變化差異性研究[J]. 韓芳,李雅嬋,趙明媛,周子娟,宋雅楠,王亮,王福金,王愛國,陳大朋,王靖宇.  實驗動物科學. 2016(06)
[7]發(fā)育性髖關節(jié)脫位發(fā)病相關因素的研究進展[J]. 常小麗,王毅.  中華小兒外科雜志. 2016 (12)
[8]發(fā)育性髖關節(jié)發(fā)育不良遺傳易感基因研究進展[J]. 李照彥,鐘磊,王金成.  中國體視學與圖像分析. 2016(03)
[9]COL1A2新突變致胎兒嚴重成骨不全癥1例報告并表型基因型關聯(lián)性文獻復習[J]. 董辰,劉姜睿璇,楊琳,任蕓蕓,周文浩.  中國循證兒科雜志. 2016(01)
[10]拉布拉多犬髖關節(jié)發(fā)育不良相關基因的SNP位點的檢測[J]. 趙明媛,韓芳,李雅嬋,俞劍熊,張雅麗,周子娟,王福金,王愛國,王靖宇.  實驗動物科學. 2015(04)



本文編號：3108271