目的:以拉布拉多犬及金毛尋回獵犬為研究對(duì)象,檢測(cè)已被報(bào)道的與髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良具有顯著關(guān)聯(lián)性的8個(gè)基因上的15個(gè)SNP位點(diǎn),驗(yàn)證其關(guān)聯(lián)性,以期找到能夠作為淘汰髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良的拉布拉多犬及金毛尋回獵犬的遺傳學(xué)標(biāo)記。方法:1.影像學(xué)診斷,對(duì)實(shí)驗(yàn)犬（CHD犬25只,健康犬30只）的髖關(guān)節(jié)部位進(jìn)行X光照射及影像學(xué)診斷,采用主觀髖關(guān)節(jié)打分（OFA技術(shù)）與Norberg角衡量相結(jié)合的診斷方法評(píng)估犬的髖關(guān)節(jié)發(fā)育狀況。2.血液樣本的獲取,征集CHD拉布拉多犬及金毛獵犬的信息,通過前肢靜脈采血的方式獲取血液樣本。3.犬基因組DNA的提取,采用Blood Genome DNA Extraction Kit試劑盒提取。4.SNP位點(diǎn)DNA片段的獲取及驗(yàn)證,查閱文獻(xiàn)獲取候選基因SNP位點(diǎn),針對(duì)這些位點(diǎn)進(jìn)行引物設(shè)計(jì),完成PCR擴(kuò)增、測(cè)序及SNP位點(diǎn)分型分析。結(jié)果:1.COL6A3基因CFA25:51040259位點(diǎn)與拉布拉多犬的CHD具有顯著關(guān)聯(lián)性（P=0.013）,CHD拉布拉多犬的A型等位基因頻率顯著偏高（P=0.006）。FN1基因CFA37:25095511位點(diǎn)與拉布拉多犬的CHD具有極顯著關(guān)聯(lián)性（P=0.... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CHD犬與健康犬的髖關(guān)節(jié)X光影像圖

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文PCR 循環(huán)：94℃ 1 min，60℃ 1 min，72℃ 1 min，循環(huán) 35 次；延伸 72℃取擴(kuò)增產(chǎn)物 20 μl 與 6×Loading Buffer 以 5: 1 的比例均勻混合，在已的 1.5%的瓊脂糖凝膠上電泳，電泳結(jié)束后，在成像儀上拍照。3.4.4. 測(cè)序及 SNP 位點(diǎn)分型將經(jīng)過驗(yàn)證的 PCR 擴(kuò)增片段委托寶生物（大連）生物技術(shù)有限公司通過測(cè)序數(shù)據(jù)的分析，確認(rèn)候選基因 SNP 位點(diǎn)的基因型多態(tài)性分布。SN基因型多態(tài)性測(cè)序結(jié)果如圖 2 所示。

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文位點(diǎn) rs3744539 與犬的 SNP 位點(diǎn) rs851998705 間隔 196 個(gè)堿基，但兩個(gè) SNP上下游序列高度重合，rs3744539 位點(diǎn)為錯(cuò)義突變，突變堿基為 G—A/C，引基酸變化為 Asp Asn/His，rs851998705 位點(diǎn)同為錯(cuò)義突變，突變堿基為 G—引起氨基酸變化為 Arg His。因而選擇 rs851998705 為候選基因位點(diǎn)進(jìn)行檢析。

【參考文獻(xiàn)】：
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