棉花是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物之一,是天然纖維和棉籽油的重要來源。近年來,黃萎病已經(jīng)成為棉花生產(chǎn)中最具毀滅性的病害,對(duì)棉花產(chǎn)量和纖維品質(zhì)構(gòu)成嚴(yán)重威脅。利用分子生物學(xué)和基因工程的方法,挖掘抗病相關(guān)基因,為棉花抗病育種提供了新途徑。本研究基于課題組構(gòu)建的黃萎病誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,從中篩選出與棉花抗黃萎病相關(guān)的2個(gè)差異表達(dá)基因。通過病毒誘導(dǎo)的基因沉默（VIGS）、轉(zhuǎn)基因等手段驗(yàn)證其在植物抗黃萎病中的功能,為棉花抗病育種提供幫助。利用同源克隆的方法,從海島棉海7124中克隆了GbVIP1基因。測(cè)序結(jié)果表明該基因ORF序列全長1014 bp,編碼337個(gè)氨基酸,是一種親水性不穩(wěn)定蛋白質(zhì)。生物信息學(xué)分析顯示GbVIP1蛋白包含保守的bZIP結(jié)構(gòu)域,是一個(gè)bZIP轉(zhuǎn)錄因子。組織表達(dá)特異性分析表明VIP1基因在棉花根部組織的表達(dá)量最高。對(duì)不同棉花材料接菌處理,發(fā)現(xiàn)抗病棉花材料中的VIP1基因顯著上調(diào)表達(dá)。利用激素噴灑處理棉花葉片,結(jié)果顯示VIP1基因受外源激素ET的誘導(dǎo)顯著上調(diào)表達(dá),這說明GbVIP1基因的表達(dá)可能與ET有關(guān)。利用VIGS技術(shù)在棉花中沉默GbVIP1基因,用黃萎病菌處理植株后,沉默目的基因的... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

VIP1蛋白激活病程相關(guān)基因PR1表達(dá)的過程（Zaltsmanetal.,2010）

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 棉花GbVIP1 基因的克隆和分子特性分析5 s，60℃ 34 s，reps 40；Stage 3：Melt Curve。實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理采用 2-△△Ct的方法（Livak et al., 2001）進(jìn)行相對(duì)定量分析，公式如下所示：F=2-[待測(cè)組目的基因 Ct 值-待測(cè)組管家基因（內(nèi)參基因）Ct 值]-[待測(cè)組目的基因 Ct 值-待測(cè)組管家基因（內(nèi)參基因）Ct 值]2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1 基因的克隆2.3.1.1 RNA 的檢測(cè)使用試劑盒提取樣品 RNA，用 1 %瓊脂糖凝膠檢測(cè) RNA 提取質(zhì)量，在凝膠成像系統(tǒng)中可以看到清晰的 28S 和 18S 兩條帶。使用 NanoDrop 2000 檢測(cè)提取的 RNA 濃度與質(zhì)量，OD260/ OD280均在 1.8~2.2 間，證明提取的 RNA 質(zhì)量較好，符合基本的實(shí)驗(yàn)要求，可以用于后續(xù)的 cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。

圖 2-1 RNA 電泳圖Figure 2-1 Elctrophoregram of RNA隆A 為模板擴(kuò)增目的片段基因，使用 1 %的瓊的片段，與估測(cè)的片段長度相符，說明成 ORF 全長 1014 bp。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3107158