龍眼（Dimocarpus longanLour.）是無患子科龍眼屬常綠熱帶/亞熱帶木本果樹,原產(chǎn)于中國(guó)華南地區(qū)和東南亞。龍眼胚胎的發(fā)育狀況對(duì)其坐果率、果實(shí)產(chǎn)量、種子大小和果實(shí)品質(zhì)等都有重要的影響。龍眼合子胚發(fā)育過程的研究存在不易觀察、取材困難、遺傳背景復(fù)雜等,在分子水平上對(duì)合子胚的研究局限很大。植物體胚發(fā)生與合子胚胚胎發(fā)生在大部分發(fā)育階段高度相似,體胚發(fā)生成為研究植物胚胎發(fā)生分子調(diào)控機(jī)制的模式系統(tǒng)。龍眼體胚發(fā)生系統(tǒng)己經(jīng)成為研究木本植物胚胎發(fā)生的模式系統(tǒng)。本研究對(duì)龍眼體胚發(fā)生早期不同發(fā)育階段進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)測(cè)序分析,以探討龍眼體胚發(fā)生過程的分子調(diào)控機(jī)制,為龍眼胚胎發(fā)育調(diào)控奠定基礎(chǔ)。同時(shí),基于龍眼EC轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行了開花時(shí)間相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)分析,并對(duì)部分開花時(shí)間相關(guān)基因及其啟動(dòng)子遺傳轉(zhuǎn)化煙草的功能研究。此外,建立了一種龍眼快速轉(zhuǎn)基因方法,為龍眼的基因功能研究與種質(zhì)創(chuàng)新提供了新的思路。1龍眼體胚發(fā)生早期轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析龍眼體胚發(fā)生早期NEC、EC、ICpEC和GE四個(gè)階段的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序共生成243,783,126高質(zhì)量reads,與參考基因組的比對(duì)率介于81.11～82.08%,... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：301 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２植物體胚發(fā)生相關(guān)基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)（引自林玉玲和賴鐘雄，２００７）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｎｅｔｗｏｒｋ?ｏｆ?ＳＥ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ｐｌａｎｔｓ?（Ｃｉｔｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｌｉｎ?ａｎｄ?Ｌａｉ，?２００７）??

形胚（ＧＥ）、魚雷形胚（ＴＥ）和子葉形胚（ＣＥ），參照賴鐘雄＿、陳春玲和賴鐘雄【３。１、??王鳳華等［１？］、方智振和賴鐘雄＿建立的方法進(jìn)行培養(yǎng)。其中ＮＥＣ、ＥＣ、ＩＣｐＥＣ、??ＧＥ四個(gè)階段的培養(yǎng)物（圖２－１）用于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，ＮＥＣ、ＥＣ、ＩＣｐＥＣ、ＧＥ、ＴＥ??和ＣＥ用于所選擇基因的ｑＲＴ－ＰＣＲ驗(yàn)證。所有樣品收集后保存于－８０°Ｃ，用于后??續(xù)ＲＮＡ提取、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和ｑＲＴ－ＰＣＲ。??圖２－１．同步化的４紅核子’龍眼體胚不同發(fā)育階段培養(yǎng)物．??ＮＥＣ：非胚性愈傷組織；ＥＣ：松散型胚性愈傷組織；ＩＣｐＥＣ：不完全胚性緊實(shí)結(jié)構(gòu)；ＧＥ：球形胚．??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚｅｄ?ｃｕｌｔｕｒｅｓ?ｄｕｒｉｎｇ?ｅａｒｌｙ?ＳＥ?ｏｆ＇Ｈｏｎｇｈｅｚｉ＇?ｌｏｎｇａｎ．??ＮＥＣ：?Ｎｏｎ－ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ?Ｃａｌｌｕｓ；?ＥＣ：?Ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ?Ｃａｌｌｕｓ，ＩＣｐＥＣ：?Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ?Ｃｏｍｐａｃｔ??ｐｒｏ－ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ?Ｃｕｌｔｕｒｅｓ，?ＧＥ：?Ｇｌｏｂｕｌａｒ?Ｅｍｂｒｙｏｓ．??１．２?ＲＮＡ提取??參照Ｔｒｉｚｏｌ?（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）試劑盒方法提取總ＲＮＡ，用ＤＮａｓｅ丨消化基因組ＤＮＡ。??采用安捷倫生物分析儀（２１００型）測(cè)定總ＲＮＡ含量與質(zhì)量，變性瓊脂糖凝膠電泳??評(píng)估總ＲＮＡ的完整性。只有當(dāng)ＲＮＡ樣品符合：Ａ２６０／Ａ２８０介于］．９？２．１，?２８Ｓ／１８Ｓ??２１．０

測(cè)編碼轉(zhuǎn)錄因子的基因，在以上四個(gè)成對(duì)比較差異表達(dá)基因預(yù)測(cè)中分別得到??７９０、３０６、４４８、１７８?jìng)�(gè)差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子，分別占總差異表達(dá)基因的７．４２％、７．３２％、??７．６６％和９．９７％。差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子按家族進(jìn)行分類表明（圖２－６），在ＮＥＣ＿ｗ＿ＥＣ??中?ＭＹＢ?（１１３）、ＭＹＢ－ｒｅｌａｔｅｄ?（９４）、Ｚｉｎ?ｆｉｎｇｅｒ?（Ｃ２Ｈ２，?Ｃ３Ｈ，?Ｃ２Ｃ２－Ｄｏｆ，Ｃ２Ｃ２－ＧＡＴＡ，??Ｃ２Ｃ２－ＹＡＢＢＹ，Ｃ２Ｃ２－ＣＯ－ｌｉｋｅ，ｚｆ－ＨＤ?和?ＴＡＺ）?（８１）、ＡＰ２－ＥＲＥＢＰ?（７７）、ｂＨＬＨ?（６０）、??＼入（：（４４）、＼＼０１１＾（４０）、入８１３乂？１（２４）、〇１＾３（２３）、１＾〇８（２２）家族成員數(shù)量最??多，占所有轉(zhuǎn)錄因子的?７３．１５％。在?ＥＣ＿ｗ＿ＩＣｐＥＣ?中，ＭＹＢ?（４３）、ＭＹＢ－ｒｅｌａｔｅｄ（３６）、??ＡＰ２－ＥＲＥＢＰ?（３３）、Ｚｉｎ?ｆｉｎｇｅｒ?（２７）、ｂＨＬＨ?（２０）、ＷＲＫＹ?（１８）、ＮＡＣ?（１５）、ＧＲＡＳ?（１４）、??ＬＯＢ?（９）、Ｔｒｉｈｅｌｉｘ?（９）家族成員數(shù)量最多，占所有轉(zhuǎn)錄因子的７３．１９％。在ＥＣ＿ｗ＿ＧＥ??中?ＭＹＢ（５７）、ＭＹＢ－ｒｅｌａｔｅｄ（４５）、Ｚｉｎｆｉｎｇｅｒ（４４）、ＡＰ２－ＥＲＥＢＰＰ９）、ｂＨＬＨ（３８）、??ＮＡＣ?（３０）、ＷＲＫＹ?（２３）、ＡＢＩ３ＶＰ１?（２１）、ＧＲＡＳ?（１９）、ＬＯＢ?（１２）家族成員數(shù)量最??多

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]龍眼胚性培養(yǎng)物DlRan3A和DlRan3B基因的功能分析[D]. 田奇琳.福建農(nóng)林大學(xué) 2017
[2]龍眼胚性培養(yǎng)物抗性相關(guān)基因的克隆與功能鑒定[D]. 葉煒.福建農(nóng)林大學(xué) 2015
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[6]龍眼體胚發(fā)生過程中SERK等胚性相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 蔡英卿.福建農(nóng)林大學(xué) 2011
[7]龍眼體胚發(fā)生過程中激素代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的克隆與表達(dá)[D]. 李惠華.福建農(nóng)林大學(xué) 2010
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碩士論文
[1]龍眼體胚發(fā)生過程中與ARF相關(guān)小分子RNA的功能研究[D]. 林麗霞.福建農(nóng)林大學(xué) 2015
[2]龍眼體胚發(fā)生過程中谷胱甘肽代謝相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)分析[D]. 任敬敬.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[3]龍眼胚性愈傷組織中若干microRNA的初級(jí)體克隆及其功能分析[D]. 王亞婷.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[4]龍眼胚性愈傷組織SOD的表達(dá)分析及啟動(dòng)子功能鑒定[D]. 曾麗蘭.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[5]龍眼古樹EC離體保存及其WRKY基因家族的克隆與表達(dá)[D]. 蔡愛萍.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[6]龍眼體胚發(fā)生過程中若干PCD相關(guān)基因的克隆及表達(dá)[D]. 馬金玉.福建農(nóng)林大學(xué) 2011
[7]荔枝EC長(zhǎng)期繼代保持與體胚發(fā)生及其蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 顧金玲.福建農(nóng)林大學(xué) 2010
[8]龍眼體胚發(fā)生系統(tǒng)的優(yōu)化及其在種質(zhì)保存與遺傳轉(zhuǎn)化上的應(yīng)用[D]. 徐清鋒.福建農(nóng)林大學(xué) 2010
[9]福州市荔枝古樹遺傳多樣性的RAPD分析及離體保存研究[D]. 李煥苓.福建農(nóng)林大學(xué) 2009
[10]龍眼體胚成熟過程的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 何園.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



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