發(fā)布時(shí)間：2021-03-28 23:33

　　蜜蜂是一種新興的模式生物,隨著蜜蜂基因組測序的完成與進(jìn)一步完善,闡明這些基因的功能,并對(duì)其中具有重大理論意義及經(jīng)濟(jì)效益的基因進(jìn)行開發(fā)應(yīng)用至關(guān)重要。本論文利用piggyBac轉(zhuǎn)座子進(jìn)行蜜蜂轉(zhuǎn)基因研究。利用生物信息學(xué)方法分析了中華蜜蜂（Apis cerana cerana）和西方蜜蜂（Apis mellifera）的潛在內(nèi)源性轉(zhuǎn)座子,得到西方蜜蜂piggyBac轉(zhuǎn)座酶轉(zhuǎn)座元件蛋白4-樣序列（Gene ID:100576623）一個(gè),和中華蜜蜂piggyBac轉(zhuǎn)座酶轉(zhuǎn)座元件蛋白（GenBank:PBC25285.1）一個(gè)。前者為1799bp的核酸序列,編碼294個(gè)氨基酸;后者為579bp,編碼192個(gè)氨基酸,經(jīng)初步分析驗(yàn)證其具有轉(zhuǎn)錄活性。對(duì)德國杜塞爾多夫大學(xué)進(jìn)化遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室Martin Beye教授饋贈(zèng)的3種轉(zhuǎn)座質(zhì)粒,進(jìn)行酶切、測序等方法驗(yàn)證其基本結(jié)構(gòu)信息。另外將外源質(zhì)粒注射進(jìn)西方蜜蜂卵中評(píng)估其質(zhì)粒表達(dá)活性,并通過反轉(zhuǎn)錄PCR檢測到目的條帶,證實(shí)這些質(zhì)粒在蜜蜂卵中有表達(dá)。在以上研究的基礎(chǔ)上,本論文探討piggyBac載體在西方蜜蜂（Apis mellifera）中的基因轉(zhuǎn)移功能,PCR擴(kuò)增和... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

蜂王卵巢（引自Dadant＆Sons,1975）

圖 1.1 蜜蜂卵的縱切面圖1.1 Longitudinal section view of （引自 Erickson et al,1986與蜂王的產(chǎn)卵習(xí)性息息相關(guān)蜂群內(nèi)的產(chǎn)卵任務(wù)。蜂王腹，卵在卵室內(nèi)發(fā)育，成熟后具有一個(gè)球狀的儲(chǔ)精囊，是道相通，當(dāng)卵子進(jìn)入陰道后隨后由蜂王產(chǎn)到工蜂巢房或卵子也可以直接發(fā)育成單倍體

第二章 蜜蜂內(nèi)源性 piggyBac-like 轉(zhuǎn)座子的鑒定與分析有 ORF2 個(gè)，選取長度在 200 個(gè)氨基酸以上的 ORF 通過在 NCBI 進(jìn)行 BLASTP 比對(duì)分析鑒定出這兩個(gè)轉(zhuǎn)座酶正確的氨基酸序列及 CDS 區(qū)。對(duì) PBLE 轉(zhuǎn)座酶序列的 N 末端和 C 末端區(qū)域進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，這兩個(gè)區(qū)域的保守性非常低，其中 N 末端的保守性最差據(jù)，Mitra 等人的研究，piggyBac 在特異性識(shí)別TTAA 的過程中，C 端 3’OH 起著更加重要的作用。故在宿主間傳播的選擇壓力下，PBLE 轉(zhuǎn)座酶的 N 末端區(qū)域發(fā)生堿基變異的速度比 C 末端快[46]。2.3.1.3 PBLE 的系統(tǒng)進(jìn)化分析在不同物種中 piggyBac 家族的序列已經(jīng)產(chǎn)生了高度分化，大多數(shù) piggyBac 轉(zhuǎn)座酶都含有一個(gè)長度約為 200 多個(gè)氨基酸的被 DDD 基序所分開的保守區(qū)域，基于此，進(jìn)行進(jìn)化樹分析相對(duì)可行。為了闡明 PBLE 在 piggyBac 家族中的的系統(tǒng)進(jìn)化地位，利用本研究獲得的 PBLEs 的氨基酸序列，和 18 個(gè)已報(bào)道的來源于昆蟲、哺乳動(dòng)物、水生生物以及植物等物種的轉(zhuǎn)座酶序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，如圖 2.1 所示：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]電穿孔導(dǎo)入法在意大利蜜蜂卵基因轉(zhuǎn)移上的應(yīng)用[J]. 郭冬生,孫亮先,黃志祥,張巧利.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2008(03)

博士論文
[1]營養(yǎng)和空間因素對(duì)蜜蜂級(jí)型分化的影響[D]. 王穎.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]蜂王侍從工蜂的特性分析[D]. 易瑤.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]蜜蜂卵期發(fā)育基因敲除試驗(yàn)[D]. 尉瑋.福建農(nóng)林大學(xué) 2014
[3]家蠶卵黃原蛋白受體（BmVgR）的全長克隆及功能分析[D]. 王艷霞.西南大學(xué) 2010



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